理解糖类的概念，掌握糖类的分类及其生物学意义。

）是多羟基醛（或酮）及其缩聚物和衍生物的总称，主要由

两种元素的原子个数比不一定是

根据糖类能否水解以及水解的程度可分为单糖、

合糖。糖类在生物体中起着重要的作用，主要有

转变为其它物质如氨基酸、脂肪等；

）具有特殊的生理功能，如糖链参与细胞的识别，血

型决定的物质等，因此近年来又出现糖生物学这一新的分支学科。

重点掌握典型单糖（葡萄糖和果糖）的结构和性质。

了解葡萄糖结构的推导过程，

重点掌握葡萄糖的链状结构和环状结构

构型的确定标准、差向异构体、链状结构转变为环状结

构后立体异构体数目的变化以及

异头物等内容的学习。根据物质的结构决定其性

而性质又反映其结构的规律，

注重从单糖的结构出发学习其理化性质；

握旋光性以及变旋现象；

化学性质从结构上理解可分为以下几种情况：

起的化学性质，如在弱碱溶液中的异构化作用、单糖的还原性（单糖的氧化）

以及生成糖脎；二是由羟基引起的化学性质如形成糖酯和糖醚、形成糖苷以及脱水作用等。

、常见双糖如麦芽糖、异麦芽糖、蔗糖、乳糖、纤维二糖、海藻糖、龙胆二糖是低聚糖内

需要从构成这些双糖的单糖单位、

单糖之间的连接键和某些性质等方面重点掌握；

了解其它寡糖如棉子糖（非还原性三糖）

、多糖分为同多糖和杂多糖，淀粉、糖原、纤维素、壳多糖右旋糖酐等同多糖是这部分的

构件分子之间的连接键和某些性质等方面进行学习，

杂多糖种类较多并且其中分子结构非

所以学习这部分内容一般要求了解，

其生理功能三方面进行学习。

、糖蛋白和蛋白聚糖属于结合糖，糖链与蛋白质之间的连接键以及糖链的生物学功能是糖

蛋白聚糖是一类特殊糖蛋白，

年）支链淀粉和糖原除（

解析：本题考点：重要的均一多糖淀粉、糖原、纤维素的组成与结构。

是许多院校常常涉及的考点，

构件分子（或基本组成单位）

、构件分子之间的连接键和某些性质这三方面把握。

年）生物体内常见的双糖有（

解析：本题考点：生物体内常见的双糖。

其中蔗糖广泛地存在于光合植物中，

乳糖则主要存在于哺乳动物乳汁中，

则主要是作用淀粉和其他葡聚糖的酶促降解产物

量不大的从头合成的游离麦芽糖库；

海藻糖则广泛地分布于藻类、真菌、地衣和节肢

动物中；别外，纤维二糖、龙胆二糖等也是常见的双糖；从知识点而言，上述这几种常见双

《生物化学实验动态》由会员分享，可在线阅读，更多相关《生物化学实验动态（77页珍藏版）》请在人人文库网上搜索。

1、教学目的教学目的 生物化学是专业基础实验课，其先修课程生物化学是专业基础实验课，其先修课程 为无机化学、分析化学和有机化学为无机化学、分析化学和有机化学 。其目的。其目的 是：学习和掌握生物技术，培养动手观察和思是：学习和掌握生物技术，培养动手观察和思 维能力。维能力。 学习方法学习方法 1 1、预习：实验前必须进行充分的预习和准备，并写出预习报告，做到心中、预习：实验前必须进行充分的预习和准备，并写出预习报告，做到心中 有数，这是做好实验的前提。有数，这是做好实验的前提。 2 2、操作：应按拟定的实验操作计划与方案进行。做到轻（动作轻、讲话、操作：应按拟定的实验操作计划与方案进行。做到轻（动

2、作轻、讲话 轻），细（细心观察、细致操作），准（试剂用量准确、结果及其记录轻），细（细心观察、细致操作），准（试剂用量准确、结果及其记录 准确），洁（使用的仪器清洁，实验桌面整洁，实验结束把实验室打扫准确），洁（使用的仪器清洁，实验桌面整洁，实验结束把实验室打扫 清洁）。清洁）。 3 3、在实验全过程中，应集中注意力，独立思考解决问题。自己难以解释时、在实验全过程中，应集中注意力，独立思考解决问题。自己难以解释时 可请老师解答。可请老师解答。 4 4、写实验报告：做完实验后，应解释实验现象，并作出结论，或根据实验、写实验报告：做完实验后，应解释实验现象，并作出结论，或根据实验 数据进行计算和处

3、理。主要包括：数据进行计算和处理。主要包括：a a、目的，、目的，b b、原理，、原理，c c、操作步骤及、操作步骤及 实验性质、现象，实验性质、现象，d d、数据处理（含误差原因及分析），、数据处理（含误差原因及分析），e e、讨论，、讨论，f f、 思考题回答。思考题回答。 实验室守则实验室守则 生物化学实验室守则是学生实验正常进行的保证，学生进入实验室必须遵守生物化学实验室守则是学生实验正常进行的保证，学生进入实验室必须遵守 以下规则：以下规则： 1. 进入实验室，须遵守实验室纪律和制度，听从老师指导进入实验室，须遵守实验室纪律和制度，听从老师指导 2. 未穿实验服、未写实验预习报告者不

4、得进入实验室进行实验。未穿实验服、未写实验预习报告者不得进入实验室进行实验。 3. 进入实验室后，要熟悉周围环境，熟悉防火及急救设备器材的使用方法和存放位置，进入实验室后，要熟悉周围环境，熟悉防火及急救设备器材的使用方法和存放位置， 遵守安全规则。遵守安全规则。 4. 实验前，清点、检查仪器、明确仪器规范操作方法及注意事项，否则不得动手操作。实验前，清点、检查仪器、明确仪器规范操作方法及注意事项，否则不得动手操作。 5. 使用药品时，要求明确其性质及使用方法后，据实验要求规范使用。禁止使用不明确使用药品时，要求明确其性质及使用方法后，据实验要求规范使用。禁止使用不明确 药品或随意混合药品。药品

5、或随意混合药品。 6. 实验中，保持安静，认真操作，仔细观察，积极思维，实验过程中必须有原始记录，实验中，保持安静，认真操作，仔细观察，积极思维，实验过程中必须有原始记录， 不得擅自离开岗位。不得擅自离开岗位。 7. 实验室公用物品（包括器材、药品等）用完后，应归放回原指定位置。实验废液、废实验室公用物品（包括器材、药品等）用完后，应归放回原指定位置。实验废液、废 物按要求放入指定收集器皿。物按要求放入指定收集器皿。 8. 爱护公物，注意卫生，保持整洁，节约用水、电、气及器材。爱护公物，注意卫生，保持整洁，节约用水、电、气及器材。 9. 实验完毕后，要求整理、清洁实验台面，检查水、电、气源，打

6、扫实验室卫生。实验完毕后，要求整理、清洁实验台面，检查水、电、气源，打扫实验室卫生。 10. 实验记录经教师签名认可后，方可离开实验室。实验记录经教师签名认可后，方可离开实验室。 实验一淀粉含量测定实验一淀粉含量测定 一、实验目的一、实验目的 1.掌握旋光仪的操作使用。掌握旋光仪的操作使用。 2.了解旋光法测粗淀粉的基本原理。了解旋光法测粗淀粉的基本原理。 二、实验原理二、实验原理 在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶 液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋 光度是不同的。其在光度是不同的。其

7、在171195之间，因此可用旋之间，因此可用旋 光法测定粗淀粉的含量。光法测定粗淀粉的含量。 三、实验仪器和试剂三、实验仪器和试剂 1、主要仪器：、主要仪器： （1）旋光仪）旋光仪 （2）电子天平（感量）电子天平（感量0.0001g） 2、试剂：、试剂： 1盐酸溶液盐酸溶液 30硫酸锌溶液。硫酸锌溶液。 15亚铁氰化钾溶液。亚铁氰化钾溶液。 四、实验步骤四、实验步骤 1.样品的处理样品的处理 在电子天平上称取小麦粉在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中置于三角瓶中加入加入 50ml 1%HCl混成浆状（不能有结块）混成浆状（不能有结块）沸水浴中准确加沸水浴中准确加 热热15min先加

8、先加1ml 30% ZnSO4混匀混匀再加再加1ml 15%亚亚 铁氰化钾混匀铁氰化钾混匀移至移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤容量瓶中加水定容混匀后过滤 弃去最初弃去最初15ml收集其余滤液。收集其余滤液。 2.旋光度测定旋光度测定 取滤液取滤液20ml置于旋光管中，先用置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪调节旋光仪 “0”点，然后将样品溶液放入旋光仪中测点，然后将样品溶液放入旋光仪中测 六、思考题六、思考题 样品加盐酸处理时，煮沸时间少于或多于样品加盐酸处理时，煮沸时间少于或多于15min会对测定会对测定 结果产生什么影响？结果产生什么影响？ 五五 、 结果计算结果计算 100

实验二氨基酸的纸上层析实验二氨基酸的纸上层析 一、实验目的一、实验目的 通过对氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方通过对氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方 法。法。 二、实验原理二、实验原理 纸层析是以滤纸作为惰性支

10、持物的分配层析，滤纸纤维上的纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的 OH具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常 把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行 层析；自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时层析；自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时 与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到 分离。分离。 三、仪器和试剂三、仪器和试剂 1、主要仪器：、主要仪器： （1）层析缸）层析缸 （2）微

11、量进样器）微量进样器 （3）喷雾器）喷雾器 2、试剂、试剂 ： （1）展开剂：乙醇：水：冰乙酸）展开剂：乙醇：水：冰乙酸50:10:1 （2）氨基酸溶液：）氨基酸溶液：0.5%的赖氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸溶的赖氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸溶 液及它们的混合液液及它们的混合液 （3）显色剂：）显色剂：0.1%水合茚三酮丙酮溶液。水合茚三酮丙酮溶液。 四、实验步骤四、实验步骤 1、平衡：将展开剂（乙醇：水：冰乙酸、平衡：将展开剂（乙醇：水：冰乙酸50:10:1）放入培养）放入培养 皿中置于密闭容器内使其充满展开剂（皿中置于密闭容器内使其充满展开剂（24h左右）左右） 2、点样：取滤纸、点样：取滤纸1张用铅

12、笔在距下方张用铅笔在距下方2cm处划线并将所得线段处划线并将所得线段 分成分成5等分从而得到等分从而得到4个标记点，用微量进样器分别取个标记点，用微量进样器分别取5l下列样下列样 品品phelyspro混合混合Aa向向4个标记点上加样（样品扩散中个标记点上加样（样品扩散中 1cm） 3、展层：将滤纸卷成筒状且不能够重叠，并用棉线扎紧然后垂、展层：将滤纸卷成筒状且不能够重叠，并用棉线扎紧然后垂 直放入培养皿中进行展层直放入培养皿中进行展层2h（当展开剂沿到达滤纸长度三分之（当展开剂沿到达滤纸长度三分之 二时，即可取出）测量展开剂前沿移动距离（二时，即可取出）测量展开剂前沿移动距离（a） 4、显色

13、：用、显色：用0.1%茚三酮茚三酮-丙酮溶液朝点样面喷雾（不要喷得太丙酮溶液朝点样面喷雾（不要喷得太 多）然后将滤纸置于电炉上方多）然后将滤纸置于电炉上方20cm处加热直至斑点出现为止，处加热直至斑点出现为止， 测量各斑点中心到点样点距离（测量各斑点中心到点样点距离（b） 1计算出各种氨基酸的计算出各种氨基酸的Rf值，并根据值，并根据Rf值鉴定出混值鉴定出混 合氨基酸中的各组分，在层析图谱上标出各氨基酸合氨基酸中的各组分，在层析图谱上标出各氨基酸 名称。名称。 2对氨基酸移动快慢的原因给予简要分析。对氨基酸移动快慢的原因给予简要分析。 五、结果计算五、结果计算 六、思考题六、思考题 ）展开剂前

14、沿移动距离（ ）（斑点中心到点样点距离 a b R f 实验三蛋白质分子量测定实验三蛋白质分子量测定 一、实验目的一、实验目的 掌握电泳基本原理、分类、影响因素掌握电泳基本原理、分类、影响因素, SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 用途用途,凝胶制备凝胶制备。 二、实验原理二、实验原理 聚丙烯聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量的方法，主要是酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量的方法，主要是 根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素 所造成的电泳迁移率的差别。所造成的电泳迁移率的差别。 在聚丙烯酰胺凝胶系统中，

15、加入一在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一 定量的十二烷基硫酸钠（定量的十二烷基硫酸钠（SDS），使所有蛋白质颗粒表面覆盖一），使所有蛋白质颗粒表面覆盖一 层层SDS分子，导致蛋白质分子间原有的电荷差异消失，此时，蛋分子，导致蛋白质分子间原有的电荷差异消失，此时，蛋 白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小。当蛋白质的白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小。当蛋白质的 分子量在分子量在之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈 直线关系。直线关系。 三、仪器和试剂三、仪器和试剂 1主要仪器主要仪器 （1）电泳仪）电泳仪 （2）电泳槽）电泳槽

16、2. 试剂试剂 （1）电极缓冲液）电极缓冲液 （2） PH 7.2 凝胶缓冲液凝胶缓冲液 （3）1%TEMED， （4）30%凝胶储液，凝胶储液， （5）10%过硫酸铵过硫酸铵 （6）0.1%考马斯亮蓝考马斯亮蓝R250染色液染色液 （4）10%乙酸脱色液乙酸脱色液 四、实验步骤四、实验步骤 1. 电泳槽的安装：取两块玻璃板电泳槽的安装：取两块玻璃板将带玻璃条的板（高板）放置桌面上将带玻璃条的板（高板）放置桌面上在上面放在上面放 置置“U”型橡胶条型橡胶条最后将凹槽玻璃板（低板）压在高板上，置于电泳槽内，用最后将凹槽玻璃板（低板）压在高板上，置于电泳槽内，用 锲子压紧。锲子压紧。 2. 凝胶液

17、的制备与灌装：配置凝胶液的制备与灌装：配置20ml凝胶液：在小烧杯中依次加入凝胶液：在小烧杯中依次加入5ml 30%凝胶储液，凝胶储液， 10ml PH 7.2 凝胶缓冲液，凝胶缓冲液，2ml 1%TEMED，2.2ml重蒸水，重蒸水，0.8ml 10%过硫酸过硫酸 铵混匀铵混匀立即沿高板内侧倒凝胶液于两板之间直至低板上沿立即沿高板内侧倒凝胶液于两板之间直至低板上沿插上梳子放置插上梳子放置 15min，待胶凝后取下，待胶凝后取下“U”条条重新将胶板放置于电泳槽内重新将胶板放置于电泳槽内向外槽内加三分向外槽内加三分 之一槽深电极缓冲液之一槽深电极缓冲液向内槽加入电极缓冲液没过低板向内槽加入电极缓

18、冲液没过低板最后拔出梳子。最后拔出梳子。 3. 加样：用微量进样器加入加样：用微量进样器加入7l标准蛋白于中间胶槽内标准蛋白于中间胶槽内其余槽内加入其余槽内加入7l下列样品下列样品 牛血清蛋白绿豆分离蛋白牛血清蛋白绿豆分离蛋白 4. 电泳：连接电极线，高板外侧接正极，低板内侧槽接负极，打开电源电泳：连接电极线，高板外侧接正极，低板内侧槽接负极，打开电源调电流调电流 120mA电泳电泳2h（当指示剂前沿超过二分之一胶长时停止）（当指示剂前沿超过二分之一胶长时停止） 5. 剥胶：取下胶板倒去电极缓冲液剥胶：取下胶板倒去电极缓冲液量取指示剂迁移距离和染色剂的前胶长，然后量取指示剂迁移距离和染色剂的前

19、胶长，然后 将胶板置于水龙头下方冲玻板四周直至胶与玻璃板分离将胶板置于水龙头下方冲玻板四周直至胶与玻璃板分离 6. 染色与固定：将胶板放入染色盒内染色与固定：将胶板放入染色盒内向其中加入向其中加入0.1%考马斯亮蓝考马斯亮蓝R250使其浸没使其浸没 置于摇床上染色过夜置于摇床上染色过夜 7. 脱色：用脱色：用10%乙酸溶液脱色至谱带清晰，测定脱色后胶长及各谱带迁移距离。乙酸溶液脱色至谱带清晰，测定脱色后胶长及各谱带迁移距离。 五五 、 结果计算结果计算 1、计算相对迁移率：、计算相对迁移率： 2、以相对迁移率、以相对迁移率MR为横坐标、为横坐标、LgMr为纵坐为纵坐 标，作出分子量标准曲线。标

20、，作出分子量标准曲线。 3、求分子量、求分子量 距离 距离 脱色后胶长 染色前胶长 ）（迁移 指示 剂示剂迁移 蛋白 质白质迁移 MR率相对 五、注意事项五、注意事项 130%Acr-Bis是神经毒化合物，操作时要小心，做好个是神经毒化合物，操作时要小心，做好个 人防护人防护 2过硫酸铵需现用现配过硫酸铵需现用现配 3过硫酸铵和过硫酸铵和TEMED在灌胶前加入即可在灌胶前加入即可 4用微量加样器上样时，勿刺破胶面用微量加样器上样时，勿刺破胶面 根据本实验所学知识，自行设计豌豆凝集素的分离纯化实验。根据本实验所学知识，自行设计豌豆凝集素的分离纯化实验。 六、思考题六、思考题 实验四淀粉酶活力测定

21、实验四淀粉酶活力测定 一、实验目的一、实验目的 学习和掌握测定淀粉酶（包括学习和掌握测定淀粉酶（包括-淀粉酶和淀粉酶和-淀粉酶）活力的原理淀粉酶）活力的原理 和方法。和方法。 二、实验原理二、实验原理 淀粉酶主要包括淀粉酶主要包括-淀粉酶和淀粉酶和-淀粉酶两种。淀粉酶两种。-淀粉酶可作用于淀淀粉酶可作用于淀 粉中的粉中的-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等 还原糖，还原糖，-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，生成麦芽淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，生成麦芽 糖。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使糖。淀粉酶催化产生的这些还原糖能

22、使3,5-二硝基水杨酸还原，二硝基水杨酸还原， 生成棕红色的生成棕红色的3-氨基氨基-5-硝基水杨酸。硝基水杨酸。 其反应如右图其反应如右图： 淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度 的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀 粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成 的麦芽糖的量表示酶活力。的麦芽糖的量表示酶活力。 淀粉酶存在于萌发后的禾谷类种子中，其中主要是淀粉酶存在于萌发后的禾谷类种子中，其中主要是

23、-淀粉酶淀粉酶 和和-淀粉酶。两种淀粉酶特性不同，淀粉酶。两种淀粉酶特性不同，-淀粉酶不耐酸，在淀粉酶不耐酸，在 pH3.6以下迅速钝化。以下迅速钝化。-淀粉酶不耐热，在淀粉酶不耐热，在7015min钝化。钝化。 根据它们的这种特性，采用加热的方法钝化根据它们的这种特性，采用加热的方法钝化-淀粉酶，测出淀粉酶，测出- 淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（-淀粉酶淀粉酶 活力活力+-淀粉酶活力），再减去淀粉酶活力），再减去-淀粉酶的活力，就可求出淀粉酶的活力，就可求出- 淀粉酶的活力。淀粉酶的活力。 三、仪器和试剂三、仪器和试剂 主要仪器：

24、主要仪器： （1）离心机）离心机 （2）分光光度计）分光光度计 试剂试剂 （1）标准麦芽糖溶液（）标准麦芽糖溶液（2mg/mL） （2）1%3,5-二硝基水杨酸试剂二硝基水杨酸试剂 （3）1%淀粉淀粉 四、操作步骤四、操作步骤 以麦芽糖含量（以麦芽糖含量（mg）为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。）为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。 1标准曲线的制作（每标准曲线的制作（每2组组4人做人做1标准曲线）标准曲线） 编号编号1#(空白空白)2#3#4#5#6# 2mg/mL麦芽糖标准液（麦芽糖标准液（mL）00.40.81.21.62.0 蒸馏水（蒸馏水（mL）2.01.61.20.80.

25、40 1%3,5-二硝基水杨酸（二硝基水杨酸（mL）222222 沸水浴中准确煮沸沸水浴中准确煮沸5min后流水冷却至室温后流水冷却至室温 蒸馏水（蒸馏水（mL） A540 2. 淀粉酶液的制备：淀粉酶液的制备： 在电子天平上称取小麦芽（在在电子天平上称取小麦芽（在9428冰箱内，用后放回）冰箱内，用后放回）0.5g置于研钵中置于研钵中 加加20ml水研成浆状水研成浆状转移至离心管中转移至离心管中2000转转/分离心分离心5min（注意离心前（注意离心前 对称放置的离心管应在天平上平衡）对称放置的离心管应在天平上平衡）取上清液于取上清液于100ml容量瓶中加水容量瓶中加

26、水 定容混匀定容混匀即得淀粉酶原液即得淀粉酶原液用于用于-淀粉酶活力测定淀粉酶活力测定 吸取原液吸取原液5ml于于100ml容量瓶中加水定容即得淀粉酶稀释液容量瓶中加水定容即得淀粉酶稀释液用于总酶活用于总酶活 力测定。力测定。 3. 淀粉酶活力测定淀粉酶活力测定 -淀粉酶活力测定淀粉酶活力测定 吸取原液吸取原液1ml于具塞试管中于具塞试管中70保温保温15min用于钝化用于钝化-淀粉酶淀粉酶加加1ml 1%淀粉置于淀粉置于40水浴中保温水浴中保温5min加加1% 3.5一二硝基水杨酸一二硝基水杨酸2ml 沸水沸水 加热加热5min后加水至后加水至20ml混匀测混匀测A1（用（用1#管调零）管调

27、零） 总酶活力测定总酶活力测定 吸取稀释液吸取稀释液1ml于具塞试管中于具塞试管中加加1ml 1%淀粉淀粉40保存保存5min加入加入1% 3.5一二硝基水杨酸一二硝基水杨酸2ml沸水加热沸水加热5min后加水至后加水至20ml混匀测混匀测A2（用（用1#管调管调 零）零） 五、结果计算五、结果计算 -淀粉酶活力（ 淀粉酶活力（）淀粉酶总活力）淀粉酶总活力-淀淀 粉酶活力粉酶活力 麦芽糖含量从标准曲线上查得麦芽糖含量从标准曲线上查得麦芽糖的毫克数麦芽糖的毫克数 原液体积为原液体积为100 稀释倍数为稀释倍数为20 规定：规定：40度度5分钟内淀粉酶水解淀粉产生分钟内淀粉酶水解淀粉产生1mg 麦

28、芽糖为麦芽糖为1个活力单位（个活力单位（u） 六、附六、附 注注 1样品提取液的定容体积和酶液稀释倍数可根据不同材料酶活性的样品提取液的定容体积和酶液稀释倍数可根据不同材料酶活性的 大小而定。大小而定。 2为了确保酶促反应时间的准确性，在进行保温这一步骤时，可以为了确保酶促反应时间的准确性，在进行保温这一步骤时，可以 将各试管每隔一定时间依次放入恒温水浴，准确记录时间，到达将各试管每隔一定时间依次放入恒温水浴，准确记录时间，到达5min 时取出试管，立即加入时取出试管，立即加入3,5-二硝基水杨酸以终止酶反应，以便尽量减二硝基水杨酸以终止酶反应，以便尽量减 小因各试管保温时间不同而引起的误差。

29、同时恒温水浴温度变化应不小因各试管保温时间不同而引起的误差。同时恒温水浴温度变化应不 超过超过0.5。 3如果条件允许，各实验小组可采用不同材料，例如萌发如果条件允许，各实验小组可采用不同材料，例如萌发1d、2d、 3d、4d的小麦种子，比较测定结果，以了解萌发过程中这两种淀粉酶的小麦种子，比较测定结果，以了解萌发过程中这两种淀粉酶 活性的变化。活性的变化。 七、思考题七、思考题 1为什么要将试管中的淀粉酶原液置为什么要将试管中的淀粉酶原液置70水浴中水浴中 保温保温15min？ 2为什么要将各试管中的淀粉酶原液和为什么要将各试管中的淀粉酶原液和1%淀粉淀粉 溶液分别置于溶液分别置于40水浴中

30、保温？水浴中保温？ 实验五蛋白质含量的测定实验五蛋白质含量的测定 一、实验目的一、实验目的 学习凯氏定氮法的原理和操作技术。学习凯氏定氮法的原理和操作技术。 二、实验原理二、实验原理 含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧 化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨 蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度蒸馏

31、到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度 降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止， 最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待 测物中的总氮量。测物中的总氮量。 三、实验试剂、器材三、实验试剂、器材 1主要仪器主要仪器 (1)凯氏定氮蒸馏装置凯氏定氮蒸馏装置 (2)消化炉消化炉 (3)电子天平电子天平 2试剂试剂 (1)浓硫酸（化学纯）浓硫酸（化学纯） (2)硫酸钾硫酸钾-硫酸铜混合催化剂硫酸铜混合催化剂 (3)

32、甲基红甲基红-溴甲酚绿混合指剂溴甲酚绿混合指剂 (4)2%硼酸溶液硼酸溶液 (5)标准盐酸溶液（约标准盐酸溶液（约0.01mol/L） (6)40%NaOH (7)0.01mol/L HCl 四、操作步骤四、操作步骤 1、消化：在电子天平上称取小麦粉、消化：在电子天平上称取小麦粉0.0g 置于凯氏试管底部置于凯氏试管底部加加 混合混合催化剂混合混合催化剂0.5g和和3ml浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（2h左左 右）取出放入通风橱内至不冒白烟，向其中加右）取出放入通风橱内至不冒白烟，向其中加20ml水，并移至水，并移至100

33、ml容量瓶定容量瓶定 容容即得样品消化液。即得样品消化液。 同时每同时每4组组8人做人做1空白实验：空白实验：0.5g混合催化剂混合催化剂+3ml浓硫酸置于凯氏试管中放入浓硫酸置于凯氏试管中放入 消化炉加热至淡绿色（消化炉加热至淡绿色（1h左右）左右）冷却后加水移入冷却后加水移入100ml容量瓶中定容得空白容量瓶中定容得空白 消化液。消化液。 2. 蒸馏与吸收：吸取蒸馏与吸收：吸取10ml 2%的硼酸于三角瓶中的硼酸于三角瓶中加加4d甲基红甲基红-溴甲酚绿混合指溴甲酚绿混合指 示剂（若变绿色则用示剂（若变绿色则用0.01mol/L HCl调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管调至紫红色）。将其

34、置于冷凝管下端并使管 尖插入液面以下，再吸取尖插入液面以下，再吸取5ml消化液从漏斗上方加入蒸馏室内用水洗两次，并消化液从漏斗上方加入蒸馏室内用水洗两次，并 加入加入10ml 40%NaOH后水封（注意：勿使漏斗内玻杆取下以防漏气），然后打后水封（注意：勿使漏斗内玻杆取下以防漏气），然后打 开通气阀进行加热蒸馏，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏开通气阀进行加热蒸馏，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏3min先移先移 去吸收液再停止加热以防倒吸。去吸收液再停止加热以防倒吸。 3. 滴定：用滴定：用0.01mol/L HCl 滴定吸收液由绿色退去变红色为止，记下耗去标准滴定吸收液由绿色退去变

35、红色为止，记下耗去标准 盐酸的体积盐酸的体积V1.V0。 C：标准盐酸溶液摩尔浓度：标准盐酸溶液摩尔浓度(0.01)。 V1：滴定样品用去的盐酸溶液平均毫升数。：滴定样品用去的盐酸溶液平均毫升数。 V0：滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均毫：滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均毫 升数。升数。 W：样品重量（：样品重量（mg）。）。 14.01：氮的原子量。：氮的原子量。 K=5.7

36、验目的一、实验目的 1加深对氨基酸两性解离的认识。加深对氨基酸两性解离的认识。 2掌握甲醛滴定法的原理及应用。掌握甲醛滴定法的原理及应用。 三、实验仪器、试剂及材料三、实验仪器、试剂及材料 1. 实验仪器：实验仪器： 微量碱式滴定管（微量碱式滴定管（10ml）、）、 2. 试剂：试剂： (1)0.5酚酞指示剂：。酚酞指示剂：。 (2)1甘氨酸即甘氨酸即1克加克加100ml水配制而成水配制而成 (3)0.1molL标准氢氧化钠溶液（使用标准氢氧化钠溶液（使用 前需标定）。前需标定）。 (4)中性甲醛溶液：取分析纯甲醛中性甲醛溶液：取分析纯甲醛(36 37)溶液溶液20ml，加，加0.5酚酞指示剂

37、约酚酞指示剂约3滴，滴， 滴加滴加0.100molL的氢氧化钠溶液，使溶液的氢氧化钠溶液，使溶液 呈微粉红色（临用前中和）。呈微粉红色（临用前中和）。 氨基酸为两性离子，在水溶液中有下列平衡：氨基酸为两性离子，在水溶液中有下列平衡： RCHCOO- +2HCHO RCHCOO- + H+ NH3+ N(CH2OH)2 常温下甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合生成亚羟甲基化合物，常温下甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合生成亚羟甲基化合物， 使上述平衡右移促使使上述平衡右移促使NH3+释放释放H+，从而使溶液酸度增加，从而使溶液酸度增加， 滴定终点移至酚酞的变色域内（滴定终点移至酚酞的变色域内（pH值值9.0

38、左右），根据滴定左右），根据滴定 终点时所消耗标准碱的量即可算出反应体系中存在的游离氨终点时所消耗标准碱的量即可算出反应体系中存在的游离氨 基即氨基氮的含量如果样品为一种已知的氨基酸，即可算出基即氨基氮的含量如果样品为一种已知的氨基酸，即可算出 该氨基酸的含量。如果样品为未知氨基酸或几种氨基酸的混该氨基酸的含量。如果样品为未知氨基酸或几种氨基酸的混 合物，则只能算出其氨基氮的含量。合物，则只能算出其氨基氮的含量。 二、实验原理二、实验原理 四、操作方法四、操作方法 已知氨基酸溶液中氨基酸含量的测定已知氨基酸溶液中氨基酸含量的测定: 取取3只三角瓶编号只三角瓶编号2ml 1% 甘氨酸甘氨酸2ml

39、 1% 甘氨甘氨 酸酸2ml 水（空白）水（空白） 均加均加5ml 水和水和5ml中性甲醛（用前加中性甲醛（用前加2滴滴 0.5% 酚酞酚酞 滴加滴加0.1mol/LNaOH调至淡红色），及调至淡红色），及4滴滴 0.5%酚酚 酞混匀酞混匀用用0.1mol/L滴至粉红色出现为止滴至粉红色出现为止分别记分别记 下耗去标准碱的体积下耗去标准碱的体积(V1.V2.V0） 五、结果处理与计算五、结果处理与计算 式中：式中：V：滴定样品所消耗标准碱的平均体：滴定样品所消耗标准碱的平均体 积（积（ml）。）。 V0：滴定空白所消耗：滴定空白所消耗 标准碱的体积（标准碱的体积（ml）。）。 C：滴定时用标准

40、氢氧化钠的浓度：滴定时用标准氢氧化钠的浓度 （0.1molL）. 14.01：lml lmolL氢氧化钠相当于氢氧化钠相当于 氮的质量（氮的质量（mg）。）。 1/)2( /1 75 2 01.14)0( ）（ ）甘氨酸含量（ ）（）甘氨酸含量（ ）氨基氮含量（ mlg mlmg mlmg CVV 说明：说明： 1.本法优点是简单快速，缺点是不够准确，其准本法优点是简单快速，缺点是不够准确，其准 确度仅达到氨基酸或氨基氮理论含量的确度仅达到氨基酸或氨基氮理论含量的90。而。而 且，如果样品液中含有脯氨酸或酪氨酸时滴定误且，如果样品液中含有脯氨酸或酪氨酸时滴

41、定误 差更大，因为脯氨酸与甲醛作用后生成不稳定化差更大，因为脯氨酸与甲醛作用后生成不稳定化 合物使结果偏低，酪氨酸的酚基结构又使结果偏合物使结果偏低，酪氨酸的酚基结构又使结果偏 高。高。 2甲醛滴定法常用以测定蛋白质的水解程度。甲醛滴定法常用以测定蛋白质的水解程度。 3中性甲醛需临用前配制。放置一段时间后，中性甲醛需临用前配制。放置一段时间后， 在使用前需重新中和。在使用前需重新中和。 六、思考题六、思考题 为什么说甲醛滴定法可以测定蛋为什么说甲醛滴定法可以测定蛋 白质的水解程度？除此之外还有哪白质的水解程度？除此之外还有哪 些方法可以用来测定蛋白质的水解些方法可以用来测定蛋白质的水解 程度？

42、程度？ 实验七酵母实验七酵母RNA的提取、组分鉴定和含量的提取、组分鉴定和含量 测定测定 一、实验目的一、实验目的 （1）了解并掌握稀碱法提取酵母）了解并掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。的原理和方法。 （2）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。）了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。 （3）掌握地衣酚显色法测定酵母）掌握地衣酚显色法测定酵母RNA含量的原理和方法含量的原理和方法 二、实验原理二、实验原理 酵母含酵母含RNA达达2.6710.0%，以酵母为原料，以酵母为原料 使用稀碱使酵母裂解，然后用酸中和使用稀碱使酵母裂解，然后用酸中和,除去除去 蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀蛋白质和菌体后的上

43、清液用乙醇沉淀RNA。 由此得到的由此得到的RNA为变性的为变性的RNA，可用作制，可用作制 备核苷酸的原料。备核苷酸的原料。 用硫酸水解用硫酸水解RNA后后,可生成磷酸、戊糖和碱可生成磷酸、戊糖和碱 基基,各成分用以下反应加以鉴定：各成分用以下反应加以鉴定： （1）磷酸与钼酸铵试剂作用可生成黄色磷）磷酸与钼酸铵试剂作用可生成黄色磷 钼酸铵沉淀。钼酸铵沉淀。 （2）核糖与地衣酚试剂作用呈鲜绿色。）核糖与地衣酚试剂作用呈鲜绿色。 （3）嘌呤碱与硝酸银反应可生成白色的嘌）嘌呤碱与硝酸银反应可生成白色的嘌 呤银化物沉淀。呤银化物沉淀。 RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的与浓盐酸共热时，即发生降

44、解，形成的 核糖继而转变成糠醛，后者与核糖继而转变成糠醛，后者与3， 5-二羟甲二羟甲 苯（地衣酚或苔黑酚）反应呈鲜绿色，该反苯（地衣酚或苔黑酚）反应呈鲜绿色，该反 应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂，反应产应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂，反应产 物在物在670nm处有最大吸收。处有最大吸收。RNA在在20250 微克范围内，光吸收与微克范围内，光吸收与RNA浓度浓度 成正比。成正比。 三、仪器和试剂三、仪器和试剂 1. 主要试剂主要试剂 （1）酵母粉）酵母粉 （2）0.04M NaOH溶液溶液 （3）1.5M硫酸硫酸 （4）无水乙醚）无水乙醚 （5）95乙醇乙醇 （6）浓氨水）浓氨水 （7）酸性

45、乙醇溶液）酸性乙醇溶液 （8）浓硝酸）浓硝酸 （9）0.1M AgNO3 （10）三氯化铁）三氯化铁-盐酸溶液。盐酸溶液。 （11）钼酸铵试剂）钼酸铵试剂 （12）50ugRNA标准溶液标准溶液 （13）苔黑酚）苔黑酚(3,5-二羟基甲苯二羟基甲苯)乙醇溶液乙醇溶液 （14）地衣酚）地衣酚-铜离子试剂铜离子试剂 （15）0.001M NaOH溶液溶液 2、器材：（、器材：（1）离心机）离心机 （2）分光光度计）分光光度计 （3）抽滤装置。）抽滤装置。 （4）电子天平）电子天平 四、实验步骤四、实验步骤 1、酵母、酵母RNA提取提取 称称5g干酵母粉于干酵母粉于20mL 0.04M NaOH溶液

46、中溶液中 并在研钵中研成浆状并转入三角烧瓶中。再并在研钵中研成浆状并转入三角烧瓶中。再 用用10mL 0.04M NaOH溶液洗涤并转入三角溶液洗涤并转入三角 烧瓶中，沸水浴加热烧瓶中，沸水浴加热30min，冷却，转入离，冷却，转入离 心管。心管。3000转转/分，离心分，离心15分钟后，将上清慢分钟后，将上清慢 慢倾入慢倾入 10mL酸性乙醇，边加边搅动。加毕，酸性乙醇，边加边搅动。加毕， 静置，待静置，待RNA沉淀完全后，沉淀完全后，3000r/min离心离心 3min。弃去上清液。用。弃去上清液。用95乙醇乙醇10 mL洗涤洗涤 沉淀。再用乙醚沉淀。再用乙醚10 mL洗涤沉淀并将沉淀转洗

47、涤沉淀并将沉淀转 移至布氏漏斗抽滤（先称量滤纸重移至布氏漏斗抽滤（先称量滤纸重W1），沉），沉 淀在空气中干燥淀在空气中干燥30min。称量所得。称量所得RNA粗品粗品 和滤纸重和滤纸重W2。W2- W1即为即为RNA粗品重量粗品重量 2、酵母、酵母RNA水解水解 取取100 mg粗提的酵母粗提的酵母RNA于三角瓶中，加入于三角瓶中，加入1.5M硫酸硫酸 10mL, 沸水浴加热沸水浴加热10分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。分钟制成水解液，然后进行组份鉴定。 3、RNA组份鉴定组份鉴定 （1）嘌呤碱：）嘌呤碱： 取水解液取水解液1mL于试管中滴加入于试管中滴加入40滴浓氨水。然后加入滴浓氨水。

48、然后加入20滴滴 0.1M硝酸银溶液，观察有无白色嘌呤碱银化合物沉淀。硝酸银溶液，观察有无白色嘌呤碱银化合物沉淀。 （2）核糖：）核糖： 取水解液取水解液1mL于试管中加入三氯化铁浓盐酸溶液于试管中加入三氯化铁浓盐酸溶液40滴和苔黑滴和苔黑 酚乙醇溶液酚乙醇溶液4滴。放沸水浴中滴。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变。注意观察核糖是否变 成绿色。成绿色。 （3）磷酸：）磷酸： 取水解液取水解液1mL于试管中加于试管中加5滴浓硝酸酸化，再加入滴浓硝酸酸化，再加入20滴钼酸滴钼酸 铵溶液在沸水浴上加热，观察有无黄色磷钼酸铵沉淀产生。铵溶液在沸水浴上加热，观察有无黄色磷钼酸铵沉淀产生。 4. R

49、NA含量测定含量测定 （1）标准曲线的制作：（每）标准曲线的制作：（每4组组8人做人做1标准曲线）标准曲线） 编号编号 1#（空白）（空白）2#3#4#5#6# 50ugRNA标准溶标准溶 液（液（mL） 00.40.81.21.62.0 蒸馏水（蒸馏水（mL） 2.01.61.20.8.0.40 地衣酚地衣酚-铜离子铜离子 试剂试剂 （mL） 222222 沸水加热沸水加热25分钟后冷却至室温分钟后冷却至室温 A670 0 以以RNA微克数为横坐标，以微克数为横坐标，以A670为纵坐标绘制标准曲线为纵坐标绘制标准曲线。 （2）样品的处理：）样品的处理： 称取称取10mg粗提的酵母粗提的酵母R

50、NA加入加入100 mL0.001M NaOH溶液溶液 混匀即得样品液混匀即得样品液. （3）酵母）酵母RNA含量测定：含量测定： 取试管取试管1支加入支加入2 mL样品液，再加样品液，再加2 mL地衣酚地衣酚-铜试剂沸水铜试剂沸水 加热加热25分钟冷却后测定分钟冷却后测定A(用用1号调零号调零) 四、结果处理四、结果处理 1. 酵母酵母RNA得率（得率（%）=（W2-W1）*100W 其中其中 W-干酵母粉重量（克）干酵母粉重量（克） 2. 粗提的酵母粗提的酵母RNA含量（含量（%）=m*V1*100V2*W/ 其中其中 W/-酵母酵母RNA重量（重量（g） m-从标准曲线上查得从标准曲线上

51、查得RNA的微克数的微克数 V1-100 mL V2-2 mL 实验八赖氨酸含量测定实验八赖氨酸含量测定 一、实验目的一、实验目的 掌握谷物中赖氨酸含量的测定方法及原理。掌握谷物中赖氨酸含量的测定方法及原理。 二、实验原理二、实验原理 蛋白质中赖氨酸的含量是谷物品质的主要指标之一。由于动物及人类不能合蛋白质中赖氨酸的含量是谷物品质的主要指标之一。由于动物及人类不能合 成，须从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价成，须从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价 值有重要意义。本实验分别用茚三酮溶液显色法和染料结合法，测定小麦种值有重要意义。本实验分别用茚三

52、酮溶液显色法和染料结合法，测定小麦种 子中赖氨酸含量。子中赖氨酸含量。 谷物蛋白中赖氨酸残基有自由的谷物蛋白中赖氨酸残基有自由的NH3与茚三酮试剂可发生颜色反应，生成与茚三酮试剂可发生颜色反应，生成 紫红色物质，其颜色深浅与赖氨酸残基的数目成正相关，而其它氨基酸没有紫红色物质，其颜色深浅与赖氨酸残基的数目成正相关，而其它氨基酸没有 自由氨基，不能发生这一反应。选用碳原子数目与赖氨酸相同的亮氨酸，配自由氨基，不能发生这一反应。选用碳原子数目与赖氨酸相同的亮氨酸，配 成标准溶液，做出标准曲线，可用以测定谷物蛋白内赖氨酸的含量成标准溶液，做出标准曲线，可用以测定谷物蛋白内赖氨酸的含量。 三、实验仪器

53、、试剂三、实验仪器、试剂 1主要仪器：主要仪器： （1）分光光度计）分光光度计 （2）离心机）离心机 （3）电子天平）电子天平 2试剂：试剂： （1）茚三酮试剂）茚三酮试剂 （2）2碳酸钠溶液碳酸钠溶液 （3）4碳酸钠溶液碳酸钠溶液 （4）0.1mg/ml亮氨酸溶液亮氨酸溶液 （5）95%乙醇乙醇 四、实验步骤四、实验步骤 1.标准曲线的制作（每2组4人做1标准曲线）

54、酮试剂（茚三酮试剂（ml）C水浴保温水浴保温30min后冷却至室温后冷却至室温 95%乙醇（乙醇（ml）555555 蒸馏水（蒸馏水（ml）5nm 以亮氨酸的微克数为横坐标，以以亮氨酸的微克数为横坐标，以A515纵坐标绘制标准曲线纵坐标绘制标准曲线 2、样品的处理与测定：在电子天平上称取小麦粉、样品的处理与测定：在电子天平上称取小麦粉10mg 于具塞试管底部于具塞试管底部加加1ml 2% 碳酸钠于碳酸钠于80水浴中保温提取水浴中保温提取 10min加加2ml茚三铜试剂茚三铜试剂80水浴中保温水浴中保温30min后冷却至后冷却至 室温室温加加5ml 95%

55、乙醇和乙醇和5ml蒸馏水充分混匀后转移至离心蒸馏水充分混匀后转移至离心 管中管中3000转转/分分 离心离心3min（离心前必须平衡）（离心前必须平衡）取上清液测取上清液测 A（以（以1号管调零）号管调零） 五、结果计算五、结果计算 赖氨酸含量（赖氨酸含量（%） 式中：式中：m：标准曲线上查出的亮氨酸的量：标准曲线上查出的亮氨酸的量(微克微克)； 1.11=Mlys/Mleu W：为样品的干重（：为样品的干重（mg）。）。 B=0.05 B100 W 实验九、凝胶层析法分离蛋白质实验九、凝胶层析法分离蛋白质 一、实验目的一、实验目的 学习凝胶层析法测定蛋白质分子量的原理，了

56、解凝胶层析法的学习凝胶层析法测定蛋白质分子量的原理，了解凝胶层析法的 操作方法。操作方法。 二、实验原理二、实验原理 凝胶层析又称分子筛层析，是利用有一定孔径凝胶层析又称分子筛层析，是利用有一定孔径 范围的多孔凝胶，对混合物中各组分按分子大小进范围的多孔凝胶，对混合物中各组分按分子大小进 行分离的层析技术。把含有不同大小分子的混合液，行分离的层析技术。把含有不同大小分子的混合液， 铺加在胶面上，让它流过凝胶柱。由于凝胶具有网铺加在胶面上，让它流过凝胶柱。由于凝胶具有网 络结构，当混合液通过凝胶颗粒缝隙中时，溶液中络结构，当混合液通过凝胶颗粒缝隙中时，溶液中 的溶质凡是比网孔小的分子，都能自由进

57、入颗粒内的溶质凡是比网孔小的分子，都能自由进入颗粒内 部而受阻滞部而受阻滞,流速缓慢流速缓慢,流程长而后被洗脱；而比网流程长而后被洗脱；而比网 孔大的分子则不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的孔大的分子则不能进入凝胶网孔而沿凝胶颗粒间的 空隙先被洗脱空隙先被洗脱(阻力小阻力小,流程短流程短,流速大流速大)。因此，在洗。因此，在洗 脱小分子物质后流出（洗脱体积大），从而达到分脱小分子物质后流出（洗脱体积大），从而达到分 离的目的。离的目的。 三、实验仪器、试剂三、实验仪器、试剂 1.主要仪器：主要仪器： （1）凝胶层析仪）凝胶层析仪 （2）电子天平）电子天平 （3）层析柱）层析柱 2.试剂：试剂：

58、（1）Sephadex G100 （2）牛血清白蛋白）牛血清白蛋白 （3）细胞色素）细胞色素C （4）血红蛋白）血红蛋白 （5）核糖核酸酶）核糖核酸酶 四、操作步骤四、操作步骤 1、凝胶的选择与处理：称取凝胶干粉加过量水浸泡过夜，弃去上层细、凝胶的选择与处理：称取凝胶干粉加过量水浸泡过夜，弃去上层细 小颗粒混匀后装柱小颗粒混匀后装柱 2. 装柱：将柱子垂直固定在铁架上，先向主内加入四分之一柱长水，装柱：将柱子垂直固定在铁架上，先向主内加入四分之一柱长水， 再将凝胶倒入柱内，打开下端开口，继续灌入凝胶，直至床面距上端再将凝胶倒入柱内，打开下端开口，继续灌入凝胶，直至床面距上端 5cm左右，观察柱

59、内凝胶是否均匀，有无气泡及断层出现。左右，观察柱内凝胶是否均匀，有无气泡及断层出现。 3. 平衡：柱子装好后放置平衡：柱子装好后放置20min，用洗脱液平衡柱子直至床面不再下，用洗脱液平衡柱子直至床面不再下 降为止，用蓝色葡聚糖降为止，用蓝色葡聚糖2000检测柱子是否均匀。检测柱子是否均匀。 4. 上样与洗脱：加样前检查床面是否平整，若不平衡用玻璃棒搅拌凝上样与洗脱：加样前检查床面是否平整，若不平衡用玻璃棒搅拌凝 胶使其自然下沉，在胶面上放置圆形滤纸片防止加样时冲击床面，用胶使其自然下沉，在胶面上放置圆形滤纸片防止加样时冲击床面，用 胶头滴管吸去上层多余水，然后慢慢滴加胶头滴管吸去上层多余水，

60、然后慢慢滴加10d牛血清蛋白样品（每组牛血清蛋白样品（每组8 人加人加1次样，两次加样间隔次样，两次加样间隔20min），待样品进入凝胶后，向床面滴加），待样品进入凝胶后，向床面滴加 2cm高度水防止干胶，拧紧螺丝；打开恒流泵，紫外检测仪，记录仪高度水防止干胶，拧紧螺丝；打开恒流泵，紫外检测仪，记录仪 及部分收集记下初始笔尖位置，直至峰值出现记录笔移动距离及部分收集记下初始笔尖位置，直至峰值出现记录笔移动距离L。 5、仪器参数设置及调整：紫外检测仪：当档位置于、仪器参数设置及调整：紫外检测仪：当档位置于100%T时，调光时，调光 量至数显为量至数显为100。当档位置于。当档位置于0.5A时时

1、麦芽糖的水解产物为（ ）

2、下列关于糖原分子结构的陈述，哪一个不正确（ ）

3、下列四种双糖中，哪一种为非还原性糖（ ）

6、某氨基酸溶于 pH = 7 的纯水中，所得该氨基酸溶液的 pH = 6，则此氨基酸的 pI（ ）

8、蛋白质分子中常见的 20 种氨基酸中，带有两个手性碳原子的氨基酸是（ ）

9、人体必需的八种氨基酸是（ ）

1、凡含有手性碳原子的有机物分子都具有旋光性质。

2、构型和构型都是研究分子中各原子或基团在空间的排布与性质关系的，所以这两个词可以通用。

3、直链淀粉分子和支链淀粉分子一样都只有一个非还原性末端。

4、支链淀粉和糖原互为同分异构体。

5、半纤维素就是分子较小的纤维素。

6、丙酮酸是酮酸，而乙酰乙酸不是酮酸。

7、旋光物质的比旋光度[α]是一个固定不变的常数。

4、什么叫淀粉的糊化与老化？

1、A 了解一下几种常见的二糖：蔗糖 葡萄糖α1→β2 果糖，无还原性 乳糖 半乳糖 β1→4 葡萄糖，有还原性 麦芽糖 葡萄糖α1→4 葡萄糖，有还原性 纤维二糖 葡萄糖 β1→4 葡萄糖，有还原性

2、D 糖原的分子结构与支链淀粉相似。主要由 d-葡萄糖通过α-1，4 联接组成糖链，并通过α-1，6 连接 产生支链。糖原分子中分支比支链淀粉更多，平均每间隔 12 个α-1，4 联接的葡萄糖就是一个分支 点（支链淀粉分子中平均间隔约为 20～25 个葡萄糖）。分子量范围从几百万至几千万。提纯的糖原 为白色无定形颗粒，还原性极弱，易溶于水而产生乳白色胶体溶液，比旋约为+200°，对碱耐受性 比较强，与碘反应呈红棕色，在醇中溶解度小，加乙醇于水溶液中可使糖原沉淀析出。

3、D 还原糖是指具有还原性的糖类。还原糖是指具有还原性的糖类。在糖类中，分子中含有游离醛基或 酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。还原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦 芽糖等

6、B 由于此氨基酸溶于水后使溶液的 pH 下降，故此氨基酸一定为酸性氨基酸。又因为它稳定后的 pH 为 6，故它的等电点必然小于 6.因为氨基酸在溶液中给出质子 H。

8、A 除了甘氨酸,其余都是手性氨基酸。苏氨酸、异亮氨酸有两个手性碳。

9、A 必需氨基酸，指人体不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必须由食物蛋白供给， 这些氨基 酸称为必需氨基酸。共有赖氨酸（Lysine ）、色氨酸（Tryptophan）、苯丙氨酸（Phenylalanine）、 甲硫氨酸（Methionine）、苏氨酸（Threonine）、异亮氨酸（Isoleucine ）、亮氨酸（Leucine ）、缬 氨酸（Valine）8 种，另一种说法把组氨酸（Hlstidine）（婴儿体内不能合成，需从食物中获取）也 列为必需氨基酸总共为 9 种。8 种人体必须氨基酸的简单记忆方法：“甲携来一本亮色书”就是甲硫 氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸。

1、错误。有机化合物中大多数都具有手性碳原子，但并不是所有含手性碳原子的化合物都具有旋 光性。内消旋的化合物就不具有旋光性。

2、错误 构型 一个有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。这种排列不经过共价键的断裂和重新形成是不 会改变的。构型的改变往往使分子的光学活性发生变化。 一般情况下，构型都比较稳定，一种构型转变另一种构型则要求共价键的断裂、原子(基团)间的 重排和新共价键的重新形成。 构象 碳原子上的原子（基团）在空间呈现无数的立体形象称为构象，这种由于绕 σ 键旋转而产生的叫 构象异构，所形成的异构体称为构象异构体。 一种构象改变为另一种构象时，不要求共价键的断裂和重新形成。构象改变不会改变分子的光学活 性。 在有机化合物分子中，由 C—C 单键（σ 键）旋转而产生的原子或基团在空间排列的无数特定的 形象称为构象，这种由 C—C 单键旋转而产生的异构体称为旋转异构体或构象异构体。 3、错误 支链淀粉分子中有许多非还原性末端，但是只有一个还原性末端，它不显示还原性。 4、错误

5、错误 半纤维素(hemicellulose)：是由几种不同类型的单糖构成的异质多聚体，这些糖是五碳糖和六碳糖， 包括木糖、阿拉伯糖和半乳糖等。纤维素（cellulose）是由葡萄糖组成的大分子多糖。半纤维素和 纤维素是两个不同的概念。

7、错误 比旋光度一般用[a]表示，即单位浓度和单位长度下的旋光度，是旋光物质的特征物理常数。由旋光 仪测得的旋光度，甚至旋光方向，不仅与物质的结构有关，而且与测定的条件有关。因为旋光现象 是偏振光透过旋光性物质的分子时所造成的。透过的分子愈多，偏振光旋转的角度愈大。因此，由 旋光仪式测得的旋光度与被测样品的浓度（如果是溶液），以及盛放样品的管子（旋光管）的长度 3密切相关。通常，规定旋光管的长度为 1dm，待测物质溶液的浓度为 1g/mL，在此条件下测得的旋 光度叫做该物质的比旋光度，用[α]表示。比旋光度仅决定于物质的结构，因此，比旋光度是物质特 有的物理常数。

4、淀粉在常温下不溶于水，但当水温至 53℃以上时，淀粉的物理性能发生明显变化。淀粉在高温 下溶胀、分裂形成均匀糊状溶液的特性，称为淀粉的糊化（Gelatinization）。稀淀粉溶液冷却后， 线性分子重新排列并通过氢键形成不溶性沉淀。浓的淀粉糊冷却时，在有限的区域内，淀粉分子重 新排列较快，线性分子缔合，溶解度减小。淀粉溶解度减小的整个过程称为老化(starch retrogradation)。"老化"是"糊化"的逆过程，淀粉老化的过程是不可逆的，不可能通过糊化再恢复到 老化前的状态。

1、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖都分别可用费林氏法直接测定其含量。

2、淀粉分子中连接葡萄糖单位的是β-1,4-糖苷键，而纤维素分子中连接葡萄糖单位的是α-1,4-糖苷键。

1、解释葡萄糖的变旋现象。

1、错误 斐林试剂用于测定还原糖，蔗糖是非还原性糖，不能用此法测定。

2、错误 淀粉分子中连接葡萄糖单位的是α-1，4 糖苷键，而纤维素分子中中连接葡萄糖单位的是 β-1， 4 糖苷键。

1、葡萄糖的变旋现象，就是由于开链结构与环状结构形成平衡体系过程中的比旋光度变化 所引起的。在溶液中α-D-葡萄糖可转变为开链式结构，再由开链结构转变为β-D-葡萄糖； 同样β-D-葡萄糖也变转变为开链式结构，再转变为α-D-葡萄糖。经过一段时间后，三种异 构体达到平衡，形成一个互变异构平衡体系，其比旋光度亦不再改变。

1、茚三酮与脯氨酸反应是，呈现（）。

10、（）是人体的八种必需氨基酸之一。

1、由 2 个葡萄糖通过糖苷键相连总共可以形成 8 种葡二糖，它们都具有还原性，这是因为葡萄糖具有还原性的缘故。

4、淀粉分子与碘的反应是淀粉分子吸附了碘分子而形成了深蓝色的物质。这个反应与淀粉分子的大小、结构无关，也不受稳定和 pH 的影响

1、C  茚三酮反应，即：所有氨基酸以及具有游离 α-氨基和 α-羧基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。此反应十分灵敏，根据反应所生成的蓝紫色的深 浅，用分光光度计在 570nm 波长下进行比色就可测定样品中氨基酸的含量（在一定浓度范围内，显色溶 液的吸光率与氨基酸的含量成正比），也可以在分离氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析

10、B 必需氨基酸，指人体不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必须由食物蛋白供给， 这些氨基酸称为 必需氨基酸。共有赖氨酸（Lysine ）、色氨酸（Tryptophan）、苯丙氨酸（Phenylalanine）、甲硫氨酸 （Methionine）、苏氨酸（Threonine）、异亮氨酸（Isoleucine ）、亮氨酸（Leucine ）、缬氨酸（Valine） 8 种，另一种说法把组氨酸（Hlstidine）（婴儿体内不能合成，需从食物中获取）也列为必需氨基酸总共 为 9 种。8 种人体必须氨基酸的简单记忆方法：“甲携来一本亮色书”就是甲硫氨酸、缬氨酸、赖氨酸、 异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、色氨酸、苏氨酸。

1、错误 两个葡萄糖通过糖苷键可以形成 8 中葡二糖，并不是这八种二糖都具有还原性。

4、错误 淀粉分子中葡萄糖单位以α-1,4-糖苷键连接，淀粉分子中的每个残基与下一个残基之间都有一定的角度， 这样淀粉就倾向于形成有规则的螺旋结构。淀粉的螺旋结构并不是十分稳定，当碘与淀粉接触时，碘分 子能够进入淀粉分子的螺旋内部，每圈可容纳一个碘分子，形成稳定的深蓝色的淀粉-碘复合物。产生的 特征性蓝色需要大约 36 个即 6 圈葡萄糖残基。支链淀粉螺旋含有 25-30 个残基，它的螺旋中的短串的碘 分子比直链淀粉的长串分子吸收更短波长的光，因此支链淀粉遇碘呈紫色到紫红色。淀粉与碘呈色反应， 与温度有很大的关系，在高温下，淀粉分子的螺旋结构遭到破坏，碘分子不能进入螺旋，不能再与淀粉 分子形成深蓝色的淀粉-碘复合物，而显示原来的颜色。

8、由两个葡萄糖所组成的葡二糖的数目为（ ）

8、D 两个葡萄糖残基之间的连接方式有 1→2，1→3,1→4，1→5，1→6 五种，此外可以是α型或者 β 型的。所以可以形成 10 种不同的二糖。

1、异麦芽糖能促进肠腔中双岐乳酸杆菌增殖，其组成为（ ）

E. 葡萄糖-葡萄糖（α-1,2 糖苷键）

1、棉子糖分子结构中有葡萄糖，所以棉子糖有还原性。

2、所谓中心氨基酸是指 pI 为 7 的氨基酸，而 pI 小于 7 的氨基酸为酸性氨基酸。

10、在观察淀粉的酶水解时常用碘液显色，当从蓝色变至碘液本色时，说明淀粉已完成水

1、B 蔗糖 葡萄糖α1→β2 果糖，无还原性

乳糖 半乳糖 β1→4 葡萄糖，有还原性

麦芽糖 葡萄糖α1→4 葡萄糖，有还原性

异麦芽糖 葡萄糖α1→6 葡萄糖，有还原性

纤维二糖 葡萄糖 β1→4 葡萄糖，有还原性

1、错误 棉子糖（Raffinose）是自然界中最知名的一种三糖，由半乳糖、果糖和葡萄糖结合而成，它 也被称为蜜三糖(melitriose)。即α-D-吡喃半乳糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D呋喃果糖苷，棉子糖是非还原性糖。

2、错误 中性氨基酸是指氨基数目和羧基数目相等的氨基酸。但是由于羧基的电离程度要比氨基大， 因此在水溶液中一般呈酸性。 酸性氨基酸是指羧基数目大于氨基数目的氨基酸。 碱性氨基酸是指氨基数目大于羧基数目的氨基酸

10、错误 淀粉酶水解时，首先水解为糊精，糊精和碘能呈现不同的颜色，有些短链糊精与碘作用没有 颜色。因此不能从碘液变成本色来判断水解是否完全。

1、在相同的 0.1mol/L 浓度下，下列哪种糖的还原性最强（ ）

4、下列哪种氨基酸的印三酮反应不呈紫色，而呈黄色（ ）

8、pI 小于 7 的氨基酸为酸性氨基酸。

10、直链淀粉分子和支链淀粉分子都只有一个非还原性未端。

1、D 还原糖是指具有还原性的糖类。在糖类中，分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离醛 基的二糖都具有还原性。还原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。 棉子糖有葡萄糖、果糖和乳糖分子构成。Gal-α1,6-Glc-α1,2-Fru。半乳糖和葡萄糖的异头 碳都参与形成糖苷键，不具有还原性。 龙胆三糖由三个葡萄糖分子缩合而成，具有还原性。由于糖链长度大于麦芽糖，还原性没有 麦芽糖强。 麦芽糖醇由于游离的醛基被还原为醇基，不具有还原性。 麦芽糖由两分子葡萄糖缩合而成，具有还原性。 蔗糖由一分子葡萄糖和一分子果糖缩合而成，不具有还原性。

4、D 茚三酮反应，即：所有氨基酸以及具有游离 α-氨基和 α-羧基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫 色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。此反应十分灵敏，根据 反应所生成的蓝紫色的深浅，用分光光度计在 570nm 波长下进行比色就可测定样品中氨基 酸的含量（在一定浓度范围内，显色溶液的吸光率与氨基酸的含量成正比），也可以在分离 氨基酸时作为显色剂对氨基酸进行定性或定量分析。

8、错误 中性氨基酸是指氨基数目和羧基数目相等的氨基酸（绝大多数氨基酸是中性氨基酸）。绝大 多数中性氨基酸的 PI 都小于 7.这是因为羧基的解离程度比氨基高。不能说 PI 小于 7 的氨 基酸是酸性氨基酸。酸性氨基酸是指羧基的数目大于氨基的氨基酸（谷氨酸，天冬氨酸）。 碱性氨基酸指氨基的数目大于羧基的氨基酸（赖氨酸，精氨酸，组氨酸）。

10、错 直链淀粉只有一条单的碳链，它只有一个还原性末端和一个非还原性末端，分子量很大，由 于只含有一个还原性末端，故没有还原性。支链淀粉具有很多个非还原性末端，但是只有一 个还原性末端，也没有还原性。

6、印三酮与羟脯氨酸反应时呈现（ ）

6、C 茚三酮反应，即：所有氨基酸及具有游离α-氨基和α-羧基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色 物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。

3、由两分子葡萄糖可组成多少种双糖？其中有多少种非还原性双糖？为什么？

8、支链淀粉与糖元互为同分异构体，所以并非只有一个非还原端。