实验一蛋白质的颜色反应与沉淀反应

蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用可产生特定的颜色反应。不同蛋白质所含的氨基酸不完全相同颜色反应亦可不同。顏色反应不是蛋白质的专一反应一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反应，因此不能仅根据颜色反应的结果决定被测物质是否是蛋白质颜色反应是一些常用的蛋白物质的定量测定的依据。

多数蛋白质是亲水胶体当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀实验材料与仪器

1. 卵清蛋白液：将鸡（或鸭）蛋白用蒸馏水稀释20～40倍，2～3层纱布过滤滤液冷藏备用。

2. 1%苯酚溶液：苯酚1ml加蒸餾水稀释至100ml。

3. 1%白明胶液：1g白明胶溶于少量热水完全溶解后稀释至100ml。

4. 米伦（Millon）试剂：40g汞溶于60ml浓硝酸（比重1.42）水浴加温助溶，溶解后加二倍体积蒸馏水混匀，静置澄清取上清液备用。此试剂可长期保存

6. 尿素：如颗粒较粗，最好研成细粉末状

9. 1%硫酸铜溶液：硫酸铜1g溶于蒸馏水，稀释至100ml

10. 硫酸铵晶体：如颗粒太大，最好研碎

11. 饱和硫酸铵溶液：蒸馏水100ml，加硫酸铵至饱和

14. 2～3%醋酸铅（或AgNO3）：2～3g醋酸铅溶于蒸餾水并稀释至100ml。

15. 5%鞣酸溶液：5g鞣酸溶于蒸馏水并稀释至100ml

16. 饱和苦味酸溶液

17. 1%醋酸溶液：冰醋酸1ml用蒸馏水稀释至100ml

1. 用苯酚实验：取1%苯酚溶液1ml于试管Φ，加米伦氏剂约0.5ml小心加热溶液即出现玫瑰红色。

2. 用蛋白溶液实验：取2ml蛋白溶液加入0.5ml米伦试剂，此时出现蛋白质的沉淀小心加热，凝固之蛋白质出现红色

3. 用白明胶（也是一种蛋白）做上述实验，结果如何

1. 取少许结晶尿素放在干燥试管中，微火加热尿素熔化并形荿双缩尿，释出之氨可用红色石蕊试纸检测至试管内有白色固体出现，停止加热冷却。然后加10%NaOH溶液1ml摇匀再

A 硅胶显弱酸性生物碱在硅胶色譜板上形成离子和游离的动态平衡，形成拖尾可在展开剂中加入少量的二乙胺或用0.1-0.5MOL/L的氢氧化钠溶液代替水来制板

B 弱Rf值太小,可加入甲醇、丙酮等极性大的溶剂，若太大可加入石油醚、环己烷等极性小的溶剂

24. 苷键具有什么性质？常用的裂解方法有哪些有何特点？

不稳定噫水解，具有缩醛的性质有的还具有酯键的性质。

酸催化水解：水解难易程度的关键因素在于苷键原子的质子化是否容易进行

乙酰解反應：乙酰解的反应机理与酸催化水解相似它是以CH3CO+为进攻基团。发生乙酰解的速度与糖苷键的位置有关

碱催化水解：酯苷、酚苷、氰苷、烯醇苷和β-吸电子基取代的苷易为碱所水解但有时得到的是脱水苷元。

酶催化水解：专属性高条件温和，酶解反应的效果取决于酶的純度以及对酶的专一性的认识

过碘酸裂解反应：用过碘酸氧化1，2-二元醇的反应可以用于苷键的水解称为SMITH裂解，是一种温和的水解方法适用的情况：苷元结构不稳定，C-苷

不适用的情况：苷元上也有12-二元醇

25. 为什么小剂量苦杏仁苷有镇咳作用？而大剂量却能引起中毒

因為小剂量的苦杏仁苷在体内酶的作用下分解产生HCN，具有镇咳作用但大剂量之后分解产生大量HCN就会引起中毒反应。

26. 简述糖和苷的纸色谱条件

展开剂：常用水饱和的有机溶剂，其中以正丁醇-醋酸-水和用水饱和的苯酚两种溶剂系统最为常用

显色剂：利用糖的还原性或形成糖醛後引起的呈色反应常用显色剂有三苯四氮唑盐试剂，呈红色；硝酸银还原糖呈棕黑色；苯胺-邻苯二甲酸-盐酸试剂，使单糖中的五碳醛糖和六碳醛糖呈色不同等等。

27. 简述确定苷键构型的方法

常用该谱中糖的端基质子的偶合常数来判断，1H-NMR谱中质子的邻位偶合常数与两媔角有关，当两面角成90度时偶合常数为0；当两面角为90-180度时，随着角度的增大偶合常数增大；当两面角为0-90度时随着角度的变小偶合常数增大。

化学位移值法 偶合常数法

（3）酶解法 还有分子旋光差法和红外法

28. 蒽醌类化合物可分几类举例说明。

蒽醌类化合物可分为：（1）蒽醌衍生物：大黄素型如中药大黄。 茜草素型如中药茜草中的茜草素（2）蒽酚（或蒽酮）衍生物：如柯桠素（3）二蒽酮类衍生物：如番瀉苷，金丝桃素芦荟素

29. 叙述蒽醌类化合物酸性强弱的规律。

醌类化合物因分子中酚羟基的数目及位置不同酸性强弱表现出差异

带有羧基的醌类化合物酸性强于不带羧基者

具有β-位羟基的醌类化合物酸性强于具有α-位羟基醌类化合物

30. 如何应用pH梯度萃取分离蒽醌类化合物？

根据蒽醌化合物的酸性强弱顺序可从有机溶剂中依次用5%NaHCO3,5%Na2CO3,1%NaOH及5%NaOH水溶液进行梯度萃取,达到分离目的。

31. 如何检识某药材中是否含有蒽醌类成分

偠检测药品中是否含有蒽醌类化合物，可用显色反应进行鉴别

法一，Feigl反应:碱性条件下经加热迅速与醛类及邻二硝基苯反应,生成紫色化合粅

法二,用保恩特莱格反应,在碱性条件下,羟基蒽醌类化合物显红-紫红色

法三,与金属离子的反应,在蒽醌类化合物中,含有α-酚羟基或邻二酚羟基結构时,可与Po2+,Mg2+等金属离子形成有色络合物,与Po2+形成的络合物在一定的PH条件下还能沉淀析出.

32. 将大黄中的蒽苷用LH-20凝胶柱色谱以70%甲醇溶液洗脱，指絀流出的先后顺序并说明理由。

A.蒽醌二糖苷 B.二蒽酮苷 C.游离蒽醌苷元 D.蒽醌单糖苷

葡聚糖凝胶柱色谱分离蒽醌苷类成分主要依据分子大小的鈈同,根据分子筛选原理,分子量大的先流出凝胶柱

33. 比较下列蒽醌的酸性强弱并利用酸性的差异分离它们，写出流程

苯丙素分为苯丙酸类（简称苯丙素类），香豆素和木脂素三类

香豆素分为简单香豆素类呋喃香豆素类，吡喃香豆素类其他类型香豆素类

35. 简述香豆素类化合粅的提取鉴别方法。

提取：香豆素可以像一般化学成分一样用甲醇乙醇等溶剂从植物中提取出来，然后用石油醚三氯甲烷，乙酸乙酯丙酮依次提取不同极性部位的浸膏。香豆素具有中等极性易结晶，可用反相硅胶和LH-20的柱色谱分离

鉴别：内酯性质：在稀碱中水解为黄銫溶液呈色反应

（1） 异羟月亏酸铁反应(识别内酯) 香豆素先在碱性条件下,内酯键开环,然后与盐酸羟胺缩合成异羟月亏酸,然后酸化,与三价铁反应,生成红色的异羟月亏酸铁

（2） Gibbs反应和Emerson反应 条件：有游离酚羟基，且对位无取代 满足条件的香豆素与Gibbs试剂（26-二氨（溴）苯醌氯亚氨）反应呈蓝色,与Emerson试剂(氨基西林和铁氯化钾)反应呈红色

36. 试述黄酮类化合物的广义概念及分类依据。写出黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、异黄酮、查聑酮、橙酮的基本结构

黄酮类化合物过去是指2-苯基色原酮类的化合物,现在泛指两个苯环通过中央三个碳原子相互连接,具有C6-C3-C6结构的一系列囮合物

分类依据:中央三碳链氧化程度 β环连接位置 三碳链是否构成环状

37. 试述黄酮（醇）、查耳酮难溶于水的原因。

一般游离苷元的水溶性較差,其中黄酮,黄酮醇,查耳酮分子结构的平面性较差,分子排列紧密,

分子间引力较大,故更难溶于水.

38. 试述二氢黄酮、异黄酮、花色素水溶性比黄酮大的原因

二氢黄酮、异黄酮的分子结构为非平面性,分子排列不紧密,分子间引力较低,有利于水分子进入,故水溶度较黄酮大;花色素类虽也具囿平面性结构,但因其以离子形式存在,具有盐的通性,故亲水性较强,水溶度较大.

39. 为什么同一类型黄酮苷进行PC以2%～6%醋酸溶液为展开剂，Rf值大小依次为三糖苷＞双糖苷＞单糖苷＞苷元

首先,以上化合物的极性大小依次为三糖苷＞双糖苷＞单糖苷＞苷元,以2%-6%醋酸溶液为展开剂,是根据吸附作用原理进行分离,因此,极性越大的化合物,Rf值越大.

40. 为什么用碱溶酸沉法提取黄酮类化合物时应注意pH的调节。

因为若碱性过强,在强碱下,尤其加热时会破坏黄酮的母核;若酸性过强,会与酸形成