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【摘要】：目的:肥胖是一种慢性低滴度的炎症,脂肪组织作为内分泌器官能够分泌众多炎性因子,本文观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对脂肪细胞增殖、分化、凋亡、及其信号通路的嘚影响,以阐述肥胖、胰岛素抵抗检查费用与炎症的关系 方法:(1)取外科手术病人腹部大网膜脂肪组织,胰酶消化法获得人原代前脂肪细胞,观察細胞的形态学变化,油红O染色对脂肪细胞进行鉴定。(2)不同浓度TNF-α(0 ng/ml、0.1 ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100 ng/ml)作用于前脂肪细胞12小时,24小时,48小时后CCK8法检测细胞增殖的情况(3)分化液誘导脂肪细胞分化至产生脂滴,分化第10天使用不同浓度TNF-α干预分化的脂肪细胞24小时后,以油红O染色法测定TNF-α对脂肪细胞分化的影响。(4)分别使用鈈同浓度TNF-α(0 ng/ml、0.1 ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、100 ng/ml)作用于脂肪细胞36小时后流式细胞法检测细胞凋亡的情况。(5)使用浓度为10ng/ml TNF-α处理脂肪细胞0小时,12小时,24小时,36小时,48小时后流式细胞法检测技术观察细胞凋亡的情况(6)采用蛋白印迹法(Western 结果:(1)TNF-α能促进前脂肪细胞的增殖,其中10ng/ml的TNF-α作用24小时后促增殖作用最强(P0.05)。(2)油红O染色结果表明TNF-α能够抑制前脂肪细胞的分化,减少脂肪的合成,以100ng/ml组最为显著(P均0.05)(3)流式检测细胞凋亡结果示:TNF-α诱导脂肪细胞凋亡的最佳浓度为10 ng/mL,而且在12 h观察到凋亡,且凋亡率在12～48 TNF-α能够有效促进人原代前脂肪细胞的增殖,抑制脂肪细胞的分化。流式检测细胞凋亡结果示:TNF-α诱导脂肪细胞凋亡的最佳浓度与时间为10 ng/mL, 36 h在脂肪细胞中,TNF-α(10ng/mL)处理36小时能够激活NF-κB,而加入该信号转导系统阻断剂(SB203580)后能够有效抑制TNF-α所诱导的NF-κB的活化。由此可见,TNF-α通过促进原脂肪细胞增殖、阻止前脂肪细胞向脂肪细胞的分化,增加脂肪细胞凋亡来参与到肥胖形成的过程,IKK-IκB-NF-κB通路的激活参与肥胖个体胰岛素抵抗检查费用的形成

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位授予年份】：2011