请教：10倍buffer和5倍buffer有何区别？(试剂盒,反应体系) - PCR实验 - 生物秀
标题: 请教：10倍buffer和5倍buffer有何区别？(试剂盒,反应体系)
摘要: [请教：10倍buffer和5倍buffer有何区别？(试剂盒,反应体系)] 我用的是TAKARA的二步法的试剂盒，第一步合成CDNA共10ul体系，我准备只取5ul来加到pcr反应体系，请问cdna合成时加了10倍buffer是否需要补加，10倍buffer和5倍buffer有何区别呢？谢谢! 关键词:[试剂盒 反应体系]……
我用的是TAKARA的二步法的盒，第一步合成CDNA共10ul体系，我准备只取5ul来加到pcr反应体系，请问cdna合成时加了10倍buffer是否需要补加，10倍buffer和5倍buffer有何区别呢？谢谢!
回复:无论10倍buffer或5倍buffer， 使用原则是在你的反应体系中它的终浓度都应该是1x的，即使用10倍buffer，则稀释10倍，使用5倍buffer，则稀释5倍。回复:谢谢j510 ，哪我从第一步反应所得cdna取部分来做PCR，应不应该补加10倍buffer，按你的说法应该补加为1倍的，但个人认为PCR哪一步10倍buffer就没有起作用呢，起作用的应该是5倍buffer，你认为呢？回复:可能我不是很明白你的问题，但这时你可以把你的cDNA看作是在水溶液里，忽略反转录体系里的离子成分，然后加PCR反应体系就行了，不知我说清楚了没有？回复:应该好好看看，TAKARA的说明书啊，呵呵RT时用的是10×RT buffer,在第二步PCR时加入5×PCR buffer,10*的加入了100mM-HCL(PH8.3),500mMKCL,而5×的没有，所以不止是浓度的问题回复:谢谢初恋的雪在下！其实我产生这个疑问正是看了你在一次回贴时给我的条件，不过后来我猜到是你写错了！：）再次谢谢！1.RT-PCR:模板 4.75uldNTP 1ulAMV 0.5ulINHIBITOR 0.25ulMGCL2 2ul5*PCR 1ul30°（10min)--42°（1h)---99°（5min)--94°（5min)2.PCR(50UL)上游引物 1UL下游引物 1ULRNAase H2O 31UL模板 5UL10*PCR 10ULTaq EXS 0.25ULmgcl2 2UL94°（5min)--94°（30sec)--55°（30sec)--70°（45min)--70(10min)回复:5Xbuffer是RT的10Xbuffer是PCR的，两个体系的buffer不是分开的吗？没用过这个kit，不了解2.PCR(50UL)上游引物 1UL下游引物 1ULRNAase H2O 31UL模板 5UL10*PCR 10UL
～～～～～～～50ul的体系不是应该加5ul吗？！Taq EXS 0.25ULmgcl2 2UL
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电话：021-求大神告知 一个神谕之石一次加多少神佑进度
发表于： 21:43:55
如题 想把武器神佑加到7&&现在是6&&问问一个神域之石加神佑进度是多少点 10倍的石头 25倍的石头是不是等同于10个和25个神谕之石的效果
发表于： 21:49:42
这件装备不错额！[好友正在使用:【魔域盒子】
发表于： 22:08:22
换个属性13以上的，这爪子没潜力[好友正在使用:【魔域盒子】
发表于： 22:11:34
回复 &&小伙伴
没钱啊兄弟 有钱我就双神佑9了
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25倍神谕之石
现在是神佑8，有2811点经验，升到神佑9总共是10000经验。还差7189。那么，问题来了，吃一个25倍神谕之石加多少经验？总共还需多少个25倍神谕之石？碎片80灵魂4金币50的区，25倍神谕之石多少MS可以入手？
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知道的说下嘛，急需啊。
楼下会告诉你
没人人来了
一个25倍神谕石头+500经验
一个神佑加20经验，360个神佑石头，二十五倍就要15个。做任务的话，四个号二十天就可以了
加8后25倍只加250……要多少自己算
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