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生化原理总结.doc22页
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1基因工程（genetic engineering）：是利用DNA重组技术，将目的基因与载体DNA在体外进行重组，然后把这种重组DNA分子引入受体细胞，并使之增殖和表达的技术
基因工程可以改变生物原有的遗传特性；获得新品种；生产新产品
2基因工程的基本步骤
a. 取得符合人们要求的DNA片段（目的基因的获取）
b. 目的基因与载体连接
c. 重组基因转化进入宿主细胞
d. 目的基因（重组细胞）的检测与鉴定
3获取目的基因：a从天然来源获取目的基因C 限制性内切酶 b人工合成目的基因C 寡核苷酸合成技术C 聚合酶链式反应（PCR）c目的基因的分离与收集C 核酸凝胶电泳
4构建基因表达载体 a基因表达载体C 质粒、病毒、混合型载体b基因的拼接C DNA连接酶c基因的改造C 定点突变技术
5将目的基因导入受体细胞 a确定重组载体DNA序列的正确性C DNA测序技术b外源基因导入宿主细胞的方法 C 转化、转染、转导
6目的基因的检测与鉴定a目的基因是否转入宿主细胞C致死性及蓝白斑筛选CSouthern印记法b目的基因是否转录出了mRNA C Northern印记法c目的蛋白质是否表达CSDS\PAGE电泳结合肽指纹谱测序
7限制修饰系统:
A 限制系统：限制性核酸内切酶（C生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶C它可以将外来的DNA切断的酶，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息）
分类：I型：
? 兼具限制、修饰两种功能
? 具有特定的识别位点，但没有特定的切割位点，一般切割位点距识别位点400bp以上，并对识别位点进行随机切割
? 很难形成稳定的特异的切割末端，在基因工程中没有应用价值
? 其限制-修饰系统由两种酶组成：一是限制酶；二
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生化简答题
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