[请教] PCR产物电泳时,目的条带很弱,加样孔附近却有非常亮的条带,为何呢? - 实验交流 - 生物秀
标题: [请教] PCR产物电泳时,目的条带很弱,加样孔附近却有非常亮的条带,为何呢?
摘要: [[请教] PCR产物电泳时,目的条带很弱,加样孔附近却有非常亮的条带,为何呢?] PCR产物电泳时,目的条带很弱,加样孔附近却有非常亮的条带,为什么呢?怎么避免?大虾指教
关键词:[条带 目的条带 蛋白质 基因组 电泳]……
PCR产物电泳时,目的条带很弱,加样孔附近却有非常亮的条带,为什么呢?
怎么避免?大虾指教.回复目的条带很弱因为量不够.
加样孔附近有非常亮的条带,可能是你的产物中Pr含量太高.回复哦，受教受教啊！回复估计taq酶加多了回复primer过量,不是应该生成二聚体,跑在最前面吗?怎么会在加样空附近呢?
Taq加多了,怎么会在加样空附近有非常亮的条带呢? 请教?回复Pr含量 应该是 蛋白质含量 （不是 primer ）
加样孔附近却有非常亮的条带
蛋白杂质移动很慢 常常在加样孔附近回复DNA在加样孔里跑不出去,
是因为它带负电荷，与带正电的蛋白质结合．
所以会出现滞留现象．回复估计是没有跑出去
原因：蛋白与DNA的结合、酶混杂、酶切条件不合适、有外切核酸酶的污染....回复有可能是你的上样缓冲液中的蔗糖浓度过大,还有就是DNA提取时蛋白没有提干净,如果是银染就会在上样孔处出现发黑的条带.回复目的条带很弱,说明
P出来了一些，
加样孔附近却有非常亮的条带可能是蛋白也可能是你的引物不好，P出了好多非目标片段！回复蛋白是正解~:D回复长见识了，以前在作试验的时候曾经遇到这样的问题，当时没有想通，也没有怎么用心去思考，今天学习了，谢谢！！！！回复还是把你的图贴出来让大家看看再做定论吧!这样干说太没底了!回复
还是把你的图贴出来让大家看看再做定论吧!这样干说太没底了! 好主意回复模板不纯吧？？？回复前几次做PCR扩增大小分别为，1800的片段都做出来了，但这次只有1300的片段扩增出来了，的未扩增出来（同一次PCR）请高人帮忙分析一下是什么原因，如何验证呢？回复
回复要么是引物质量不好，加样孔是剩余的基因组；要么是你的dNTP被污染了。回复一：DNA过量
二：多糖污染回复会不会是基因组DNA污染啊?
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电话：021-电泳时点样孔里发亮是怎么回事(电泳,跑电泳,点样孔,目的条带) - PCR实验 - 生物秀
标题: 电泳时点样孔里发亮是怎么回事(电泳,跑电泳,点样孔,目的条带)
摘要: [电泳时点样孔里发亮是怎么回事(电泳,跑电泳,点样孔,目的条带)] 请问各位师兄师姐：我跑电泳时，总会出现这样的情况 :目的条带没有，点样孔里倒是亮亮的 无论是跑DNA还是RNA 都出现过这样的情况。麻烦大家帮忙分析一下。 关键词:[电泳 跑电泳 目的条带 点样孔]……
请问各位师兄师姐：我跑电泳时，总会出现这样的情况.:目的条带没有，点样孔里倒是亮亮的.无论是跑DNA还是RNA 都出现过这样的情况。麻烦大家帮忙分析一下。
回复加样孔这个位置提供的是杂质残留的信息。导致加样孔发亮的原因非常多，其中最主要的是非蛋白质/非核酸类的大分子杂质 (如多糖、多酚) 的残留以及蛋白质和核酸的同步残留。大分子杂质的残留，首先与样品本身有关 (如植物、菌、动物肝脏、肺等)，其次与所使用的方法/去除这些杂质的能力有关。蛋白质和核酸的同步残留，少量与样品有关 (如肌肉)，大部分则与所使用的方法/，以及操作不当有关。另外，样品使用过量，也是一个重要原因。还有，加样孔不干净也有可能，但是可能性不大。回复请问civcul，如果是PCR产物出现加样孔很亮，目的片段条带很弱或者几乎没有，是什么原因造成的？加样孔残留是蛋白吗？是不是模板的原因还是操作上的原因？回复请问各位师兄师姐：我跑电泳时，总会出现这样的情况.:目的条带没有，点样孔里倒是亮亮的.无论是跑还是RNA 都出现过这样的情况。麻烦大家帮忙分析一下。我也遇到这种情况，我在做TAIL-pcr的时候，有段时间经常出现这种情况，一直搞不明白原因，后来不知怎么就没有了！那时候我导师认为PCR扩增时形成的非特异片断可能链接在一起，形成所谓的“超大片断”，电泳的时候就会在点样孔附很亮，但是没有目的片断。但是原因他也没有办法解释的很清楚，文献中也很少有关解释。回复请问civcul，如果是PCR产物出现加样孔很亮，目的片段条带很弱或者几乎没有，是什么原因造成的？加样孔残留是蛋白吗？是不是模板的原因还是操作上的原因？不知道你的模板是什么？c?可能与模板不纯有一定关系。DNA或RNA提取时量尽量减少杂质，模板量不要太大，试试看。还可以改变一下反应条件，如Mg++的浓度。回复我也出现过在PCR时，点样孔很亮，但是目标条带没有的情况，希望能了解原因。。。。。。。回复“有段时间经常出现这种情况，一直搞不明白原因，后来不知怎么就没有了”这句话能说明其中的一点原因：哪次做胶过程或者提取过程出现了问题，那么这次就会部分或者全部被“堵住”。提取过程出现问题主要是civcul所说的大分子物质与核酸同步残留。这个不怎么好控制，只能自己尽量注意。做胶出现问题是指胶浓度相对过高。比如你想把10000的Marker跑漂亮了，就得降低浓度用0.8%的胶。个人想法，仅供参考。
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电话：021-PCR电泳时maker条带很暗的原因？我跑出来的PCR目的条带很亮，但maker很暗，每一个加样孔的条带一样暗，换另外的maker也是这么暗，可是其他同学用我这个maker跑出来就很亮，我想请问一下是什么原因呢？我和同学做PCR时除了样本不一样外，其它的试剂、步骤等都是一样的啊。我并不是为了让她亮而亮，我是想知道原因？谢谢！ 如果是缓冲液或者我点样水平的问题，为何目的条带跑出来这么漂亮？
marker量多加点嘛
原因可能是缓冲液的问题，也可能是你点样水平太搓了
彻底换一下缓冲液，一般marker都加5-8微升，不知道你是不是加的量少啊？
这样的话除了Maker加的量少的话，还有可能就是你的样品浓度较高，适当稀释一下样品看看。
恩，你的加样量可能不够，多加一点MARKER吧，肯定会很亮的，我也出现过你这种情况，
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