【摘要】：河田鸡和艾维茵肉鸡的睾丸,经硫酸铵分级沉淀、DEAE-32离子交换柱层析,获得比活力为54.84 U.mg-1,纯化倍数为8.86的河田鸡睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)制剂.艾维茵肉鸡睾丸NAGase经Sephacry S-300凝胶过滤层析柱进一步纯化,获得比活力为171.50 U.mg-1,纯化倍数为19.8倍的NAGase制剂.以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学.结果表明:河田鸡和艾维茵肉鸡睾丸NAGase的最适pH分别为5.6、5.7,最适温度分别为55、50℃;NAGase分别在pH为3.0-9.2、4.0-9.2及温度为10-60、10-30℃下能保持稳定;NAGase酶促反应动力学均符合米氏双曲线方程,测得米氏常数(Km)分别为0.223、0.319

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kDa,每个酶蛋白分子含有364个氨基酸残基,其中非极性占35.2%,碱性占16.4%,酸性占24.2%;极性不带电荷的占24.2%.该酶为单亚基酶,肽链内含有二硫键.该酶为糖蛋白,其中含糖量为3.03%(W/W).以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(pNP-NAG)为底物,测得该酶在0.2mol/L磷酸缓冲液(pH5.6)中催化水解pNP-NAG的最适pH为5.6,最适温度为50℃.该酶在pH mmol·L~(-1). 牛精液稀释成分青霉素钠,硫酸链霉素对酶的活力没有影响.柠檬酸钠对酶有微弱的抑制效应,氯化钾对酶有先扬后抑作用.葡萄糖和碳酸氢钠对酶有不同程度的抑制作用,葡萄糖对酶的抑制作用表现为可逆竞争性抑制机制,其KI为0.36 mol·L~(-1).碳酸氢钠对酶的抑制作用表现为可逆反竞争性抑制机制,其抑制常数KI为7.01 mmol·L~(-1).