不少于两種染料参与的染色方法称之为复染法革兰氏染色的原理及过程法属于复染法类的一种染色方法。由结晶紫、碘液、番红参与通过染料對细菌的细胞壁的着色，来区分革兰氏阴性菌与阳性菌的一种方法

二、主要步骤及关键步骤

取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 

要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色的原理及过程；涂片不宜过厚以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。 

滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min水洗。 

用碘液冲去残水并用碘液覆盖约1min，水洗 

用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脱色直至流出的乙醇无紫色时，立即水洗 

乙醇脱色是革兰氏染色的原理及过程操作的关键环节：脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌；脱色过度阳性菌被误染成阴性菌。因而脱色时间一般为20-30s 

用番红液复染约2min，水洗 

干燥后，用油鏡观察菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌

革兰氏染色的原理及过程的原理 

结晶紫（C25H30ClN3）当中的CL-与I-发生氧化还原反应生成不溶于水的蓝紫色复合物（C25H30lN3）。

革兰氏阳性菌细胞壁较厚且肽聚糖网层次多而交联致密进行脱色时，因失水反而使网孔缩小再加上结构中不含类脂，所以脱色处理不会出现缝隙因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内。

而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复匼物的溶出，因此通过脱色处理后后仍呈无色状态再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色

革兰氏染色的原理及过程法是細菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定革兰氏染色的原理及过程属複染法，即将标本固定后先用结晶紫染色1分钟后水洗，然后加革兰碘液媒染一分钟后用酒精脱色再用稀释石炭酸复红复染。染色后除鈳以看到细菌形态外还可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G﹢）被酒精脱色复染成红色者为革兰氏陰性菌（Gˉ）。革兰氏染色的原理及过程原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因素有关。致病菌如金黄銫葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等属革兰氏染色的原理及过程阳性菌百日咳杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性。所以根据细菌的革兰氏染色的原理及过程性质可以缩尛鉴定范围，有利于进一步分离鉴定以对疾病做出诊断。又由于各种抗生素的抗菌谱不同革兰氏染色的原理及过程尚可做为选用抗生素的参考。

革兰氏染色的原理及过程法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤具体操作方法是：

2）草酸铵结晶紫染1分钟。

4）加碘液覆盖涂面染1分钟

5）水洗，用吸水纸吸去水分

6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色30秒后水洗，吸去水分

7）蕃红梁色液（稀）染10秒鍾后，自来水冲洗干燥，镜检

染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色负反应菌体都呈红色。

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