一直说基因突变丰度高好还是低好概率很低,究竟是什么数量级

    由于同一个样本中的不同蛋白和肽段离子化效率不同绝对定量的信息获取具有很大挑战。多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)技术是一种基于已知或假定的反应离子信息有针对性地选择數据进行质谱信号采集,对符合规则的离子进行信号记录去除不符合规则离子信号的干扰,通过对数据的统计分析从而获取质谱定量信息的质谱技术利用质谱多反应监测技术与同位素稀释相结合,通过对比已知浓度的标记标准品与待测样品目标离子峰面积信息从而推算分析物含量。

    平行反应监测(Parallel Reaction MonitoringPRM)属于靶向MS/MS分析,在整个液相分离过程中会不断地对每一个目标母离子的全部碎片离子图谱进行记录楿比于传统SRM只检测目标离子对的模式,PRM检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息在文献中,在Q Exactive质谱上进行的该分析模式被称为PRM而在LTQ線性离子阱或LTQ-Orbitrap质谱上则被称为SRM。相比而言四极杆的优势在于离子分离速度和效率更高,以及能够使用多重单离子监视(SIM)而且制造成本更低。PRM主要的优势就是使用了超高分辨率的Orbitrap质量分析器其能够将干扰信息与真实的信号进行区分,以及相比于传统的SRM方法能够更好的保证汾析的选择性其缺点是能够监视的母离子的数量取决于Orbitrap分析器的工作循环或瞬时长度以及色谱条件。虽然其数量能够通过利用time-scheduling、parallelization和降低Orbitrap的分辨率来增加。PRM方法曾被用于定量酵母细胞裂解液中的10个聚泛素肽链与早期的研究结果一致,该方法的动态范围至少有3个数量级其定量误差<10%。而且无论是分选宽度还是基质干扰都不会改变其定量准确性最低检测限低于0.1

案例:筛选乳腺癌转移的生物标记物

    结合shotgun技术與靶向性的MRM技术,筛选可以作为乳腺癌生物标记物或者治疗靶标的乳腺癌转移相关蛋白质利用label N-糖基化蛋白质定量技术,鉴定到778个蛋白质嘚1515个糖基化肽段结合MRM技术,发现10个蛋白质的在转移的乳腺癌组织中异常表达最后验证发现5个潜在的乳腺癌转移的生物标记物。

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根据国家发展改革委办公厅、工業和信息化部办公厅关于做好2019年技改专项项目申报工作的要求现就有关事项通知如下:

一、该专项由国家发展改革委、工业和信息化部(以下简称两部门)按照《2019年补助工作方案》(见附件1)共同组织实施,集中支持《2019年重点方向》(见附件2)明确的智能化改造及质量提升工程、高端装备发展及基础能力提升工程、关键新材料发展工程3个重点领域

二、项目(或示范应用类项目的依托工程)固定资产投资原则上不得低于2亿元。产品填补国内空白或工艺技术世界领先的项目固定资产投资规模可放宽至1亿元。中央预算内投资按项目固定资产投资15%的比例予以补助单个项目最高投资补助限额原则上不超过1亿元人民币。

三、各市发改委、经信委要按照《中央预算内投资补助和贴息项目管理办法》等投资管理规定对拟上报安排的项目进行严格审查,确保项目符合以下条件:项目符合《2019年重点方向》相关要求项目采用的工艺技术先进可靠且知识产权明晰,项目审批(备案、环评、用地、规划、节能、安全评价等)手续符合有关规定项目没有获嘚过中央预算内投资支持等情况,并对申报材料的真实性、合规性和审查结果负责

四、申报文件中须包含以下两方面内容,否则不予参加评审一是要逐一明确项目单位及项目责任人、日常监管直接责任单位及监管责任人。二是申报企业要写明在年获得中央预算内投资安排的项目和补助金额以及项目是否已经验收,有未验收项目的企业原则上不予支持;没有获得过中央预算内投资支持的也要予以明确

伍、各市发改委、经信委要加强内部各处之间、以及与本地区相关部门的工作沟通,避免已经申报过其他中央预算内投资专项的项目重复申报、多头申报2018年国务院大督查及中央环保督查“回头看”等检查中被点名批评的企业、“信用中国”网站受惩戒黑名单企业等不得申報。

六、各地申报工作由各市发改委、经信委负责在12月5日前先联合将项目汇总表(见附件3)加盖公章上报,每个市限报6个项目项目正式申报文件(一式两份)、具有相应资质的咨询机构编制的资金申请报告纸质版和电子版光盘(一式四份,项目资金申请报告待省级层面審核通过后再另行通知编制)于12月13日前分别报送至浙江省发展改革委、经信厅。在申报文件中可同步上报一批符合支持方向、建设要件齊备的储备项目(申报时要明确项目类型储备项目不需要提交资金申请报告)。

七、各市发改委、经信委要通过国家重大建设项目库“姩度计划报送”模块将省级审核通过的项目(含储备项目)尽快报送至国家发展改革委产业协调司相应处。

附件:1.2019年补助工作方案

??????2.2019年重点方向

??????3.技术改造专项项目汇总表

????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????2018年11月26日

2019年补助笁作方案

根据《国务院关于促进企业技术改造的指导意见》(国发〔2012〕44号)和《中央预算内投资补贴和贴息项目管理办法》(国家发展和妀革委员会令2017年第45号)制定本工作方案。

(一)技术改造专项资金(以下简称“专项资金”)是指用于促进产业战略性、基础性、全局性工业企业技术进步和技术改造项目(以下简称“项目”)的专项资金主要用于关键技术的产业化或工程化、购置仪器设备、改善工艺設备和测试条件、国产重大技术装备及关键零部件示范应用,及必要的配套基础设施等

(二)专项资金的管理和使用应当符合国家宏观經济政策、产业政策和区域发展政策,坚持公开、公正、公平的原则确保专项资金的规范、安全和高效使用。

(三)专项资金由国家发展改革委、工业和信息化部共同管理

二、资金支持方式及标准

(一)专项资金以投资补助的方式支持项目建设,补助资金为无偿投入

(二)单个项目安排投资补助的资金额度为项目固定资产投资的15%,最高投资补助限额原则上不超过1亿元人民币

(三)单个项目的投资补助资金原则上一次性安排。已通过其他渠道获取中央财政资金支持的项目不得申请本专项资金。

三、项目申报与资金下达

(一)国家发展改革委、工业和信息化部根据工业发展规划、产业政策按照专项支持的重点方向、指标参数、预定目标、工作程序、支持方式、时限偠求等,对项目申报工作做出安排

(二)项目单位须委托专业咨询机构组织编制资金申请报告。地方企业项目由各省级或计划单列市(鉯下简称地方)发展改革委、工业主管部门联合向国家发展改革委、工业和信息化部报送项目申请中央企业控股子公司项目由央企总部申报。

地方可根据自身情况自行确定本地区内项目组织申报流程和部门分工,原则上要减少环节、提高效率

(三)申请专项资金的项目必须具备以下基本条件:

1、项目必须符合专项资金支持的具体方向和参数要求。

2、项目必须已按有关规定核准或备案环境影响批复(戓备案)、土地使用权证(或用地预审)、规划许可证、节能审查等要件齐备。根据国家发展和改革委员会令第44号年综合能源消费量不滿1000 吨标准煤,且年电力消费量不满500 万千瓦时的固定资产投资项目豁免节能审查此类项目须在资金申请报告中提供盖有企业公章的能耗说奣材料。根据国家有关规定须进行安全评价的还需提供安全评价审查意见

3、项目(或示范应用类项目的依托工程)固定资产投资不低于2億元。

4、项目所采用工艺技术先进可靠知识产权归属明晰。

5、项目具有良好的社会和经济效益符合节能、降耗、安全、环保等要求。

6、项目符合国家固定资产投资有关法律法规

(四)地方要建立严格的申报项目审核工作机制,确保申报项目前置条件齐备真实、相关技術参数指标符合要求

(五)国家发展改革委、工业和信息化部委托具有专业资质的第三方评估咨询机构对项目进行竞争性评审,评审内嫆为:

1、项目符合规定的具体方向和参数要求;

2、项目工艺技术的先进性和适用性;

3、项目单位的经营能力和工程建设的管理能力;

4、项目的市场前景和经济效益;

5、项目实施方案的合理性和可行性;

由受托评估咨询机构对每个方向的评审项目按照评审打分进行排序国家發展改革委、工业和信息化部机关工作人员一律不得参与、更不得干预项目评审。

(六)由国家发展改革委、工业和信息化部按照科学、公平、择优的原则根据咨询机构的评审打分排序,由高到低选取项目联合审核批复资金申请报告。

(七)国家发展改革委、工业和信息化部根据项目资金申请报告的批复编制下达投资计划。

(一)专项资金项目实行项目单位责任制项目单位依照有关法律法规负责项目的筹划、筹资、建设、运营等,自觉配合有关部门做好对国家补助资金使用的检查、审计工作并按照地方发展改革委、工业主管部门偠求报送有关项目进展情况。

(二)项目单位按照资金申请报告批复内容组织实施不得擅自改变项目的建设内容和目标。项目实施过程Φ如果出现重大变化地方发展改革委、工业主管部门须向国家发展改革委、工业和信息化部报送项目终止、撤项或调整申请。

(三)地方发展改革委、工业主管部门对项目实施和国家投资补助资金的使用进行管理

(四)国家发展改革委、工业和信息化部要加强项目的事Φ事后监督管理。地方发展改革委、工业主管部门在重大建设项目库中按月报送项目进度情况信息国家发展改革委、工业和信息化部适時选择若干项目开展后评估工作。

(五)项目建设内容和目标完成后项目单位要及时做好项目验收准备工作,并向项目主管部门提出项目验收申请项目主管部门要及时对项目进行验收。项目单位要按国家有关规定妥善保管项目有关档案和验收材料

(六)国家发展改革委、工业和信息化部要严格遵照有关规定组织项目。认真执行责任考核和问责制度积极配合审计、监察等部门的工作,并主动接受社会監督

(七)项目单位有骗取、转移、侵占或者挪用国家投资补助资金、拒不接受依法依规进行审计、监察和检查等行为的,国家发展改革委、工业和信息化部可责令地方发展改革委、工业主管部门监督其限期整改对整改不到位的可采取核减、停止拨付或收回国家投资补助资金,以及在一定时期内不再受理其申报其它项目等措施进行处罚根据情节,提请或移交有关机关依法追究有关责任人的行政或法律責任

(八)各级主管部门和相关中介机构的工作人员要严格遵守有关法律法规和廉政纪律,对违规审批、滥用职权、玩忽职守、徇私舞弊、索贿受贿等行为根据情节,依法追究有关责任人的行政责任;构成犯罪的由司法机关依法追究其刑事责任。

(九)本方案由国家發展改革委、工业和信息化部负责解释

一、智能化改造及质量提升工程

(一)智能制造示范工厂

基于自主可控的工业互联网平台,集成应鼡自主品牌集散式控制系统(DCS)、数据采集与视频监控系统(SCADA)、制造执行系统(MES)等工业控制系统及计算机辅助设计(CAD)、工程(CAE)、笁艺规划(CAPP)、制造(CAM)、产品全生命周期管理(PLM)等工业软件,主要采用自主品牌智能装备支持工业企业建设改造工业互联网内网络,建设智能化示范工厂项目建设投资中自主品牌产品(含装备、系统、软件)采购额占比在60%以上,通过工业互联网将研发设计、生产制慥、市场营销、增值服务等环节进行一体化集成关键装备数控化率达到80%以上、生产数据自动采集率达到90%以上、数据采集分析系统与制造執行系统(MES)之间的数据自动传输率达到100%。项目采用自主品牌工业机器人、AGV(自动导引车)已通过CR认证优先支持(在资金申请报告中提供CR認证证书复印件)

(二)药品质量提升工程

加快肿瘤、心脑血管、神经系统等重大疾病领域,市场潜力大、临床价值高的创新药物及疗效确切、安全性高、有效成分明确、作用机理清晰的中药新药、新经典名方产品产业化(化学药1类、2类新药生物药1类新药,中药1-6类新药2015年来新批准上市,或已进入三期临床研究阶段或已申报生产),推动国外专利到期药品首家化学仿制药和生物类似药产业化开发加強市场急需的短缺药、儿童药、罕见病药、高性能药用辅料和包材的供应保障能力建设。促进新型疫苗产业化及现有疫苗供应保障能力的提升

(三)危险化学品生产企业提质升级工程

危险化学品生产企业提质升级:按照《国务院办公厅关于推进城镇人口密集区危险化学品苼产企业搬迁改造的指导意见》(国办发〔2017〕77号)的要求,推动符合要求的危险化学品生产企业搬迁进入合规设立的化工园区或以化工为主的产业集聚区促进危险化学品生产企业转型升级和高质量发展,严格落实《国务院办公厅关于石化产业调结构促转型增效益的指导意見》(国办发〔2016〕57号)不得借机扩大过剩产能。

石化绿色工艺改造:推动企业采用先进绿色工艺实施技术改造,优先支持采用《绿色石化工艺名录(2018年版)》所列工艺

园区公共服务平台建设:加快省级及以上化工园区安全环保基础设施及产品研发、设计制造、试验检測、应用示范、标准制定等公共服务平台建设。

(四)冶金建材产业先进工艺技术改造工程

推动基于自主品牌装备(系统)的高精度减定徑机组等高技术装备在优特钢、不锈钢棒线材生产领域的应用示范提升产品品质。在不新增产能的前提下推动基于高固气比悬浮余热汾解、协同处置固体废弃物、精细化能效管控等先进适用技术实施集成改造的高质量高效率干法水泥示范项目;推动采用先进技术集成改慥的高质量高效率浮法玻璃示范项目,增加品种提升品质

(五)轻工纺织重点产品品质提升工程

轻工行业重点产品品质提升:在家电、镓具、五金制品、婴童用品、乳制品加工、发酵、造纸、皮革、电池、洗涤用品、照明、钟表、缝制机械、文体用品、制糖、盐业等轻工業重点行业,支持高端装备制造、技术装备升级、智能生产、绿色生产、创意设计、公共服务平台建设等推动质量提升和品牌建设,促進行业高质量发展

纺织行业重点产品品质提升:在棉纺、化纤、印染、服装、针织、家纺、产业用纺织品等重点行业,支持智能装备制慥、生产线智能化改造、绿色生产提高消费品品质,满足市场及品牌发展需求

二、高端装备发展及基础能力提升工程

系列化中国标准動车组等高速动车组及关键系统、核心部件。驮背运输专用车、新型钢轨探伤车、接触网智能检修车等货运和养修装备及关键系统、核心蔀件

地铁、市域快轨、中低速磁浮、单轨、有轨电车等中国标准城轨装备及关键系统、核心部件。

轨道交通装备研发、试验、检测装备囷应用平台等

(二)高端船舶和海洋工程装备

超大型集装箱船、豪华客滚船、大型液化天然气运输船、超大型液化石油运输船、大洋钻探船、深远海综合科考船、极地科考破冰船等高端船舶及关键系统、核心部件。

第七代半潜式钻井平台、海上大型浮式生产储卸油装置、浮式液化天然气储存下再气压装置、深远海渔业养殖平台、海上新能源开发装备、海上平台拆解装备等海洋工程装备及关键系统、核心部件

船舶和海洋工程装备设计、研发、试验、检测装备和应用工程平台等。

(三)新能源与节能汽车

新能源汽车先进技术研发及产业化能仂建设非金属复合材料、高强度轻质合金、高强度钢等轻量化车身及零部件,全功能、高性能的整车控制系统及关键零部件高效驱动系统及关键零部件,先进车用动力电池、燃料电池及材料高水平车载充电设备,车用动力电池等制造检测技术和专用装备

节能汽车高效发动机、先进自动变速器和混合动力系统等节能技术、关键零部件和装备。

面向行业的共性技术研发、测试等公共服务和创新平台

大型高效联合收割机、甘蔗收获机、高效低损谷物收获机、大马力拖拉机、块茎联合收获机等农机装备及关键系统、核心部件。

高端农机装備研发、试验、检测装备和平台智能农机装备物联网平台、大数据中心、运维平台等。

冶金建材、石油化工、轻工纺织、能源电力、工程机械、重型矿山、通用机械等领域重大技术装备及关键系统、核心部件

重大技术装备设计、研发、试验、检测装备和平台等。

(六)高性能医疗器械工程

推动手术机器人、高能直线加速器等治疗设备全实验室自动化检验分析流水线(TLA)、高通量基因测序仪等体外诊断產品,全降解冠脉支架、双腔心脏起搏器、神经刺激器等新型植入介入产品PET-MR、PET-CT、CT、DSA等高性能影像设备的创新、升级换代以及质量性能提升。

三、关键新材料发展工程

(一)先进金属材料发展工程

1.汽车用超高强钢板及零部件用钢:(1)MPa级别第三代汽车钢其中冷轧板强塑积≥15GPa%。(2)1000MPa级延伸率≥21%1200MPa级延伸率≥17%,1500MPa级延伸率≥14%

2.高性能船舶和海洋工程用钢及高端海洋用管:(1)460MPa级大厚度高止裂钢板:厚度≥70mm,-10℃止裂韧性Kca≥6000N/mm3/2或在标准规定的应力条件下止裂温度Tk≤-10℃。(2)耐-60℃以下低温极地船舶用钢:屈服强度≥500MPa抗拉强度610-770MPa,延伸率≥16%-80℃冲击韧性橫向50J、纵向70J,-40℃ CTOD性能0.2mm(3)厚度0.4-8mm LNG船用殷瓦钢钢板:-196℃时冲击试验≥18J/cm2(min),屈服强度≥275MPa抗拉强度≥460MPa。(4)海洋平台桩腿结构用高强钢:X100Q钢級屈服强度

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单细胞测序技术概览 摘要: 2013年单細胞测序技术开始成为科研界主流关注的焦点。前言2013年单细胞测序技术(single-cell sequencing)荣膺《自然-方法》年度技术。单细胞测序技术有助于我们剖析细胞的异质性它可以揭示肿瘤细胞基因组中 ... ? 2013年,单细胞测序技术开始成为科研界主流关注的焦点 前言 2013年,单细胞测序技术(single-cell sequencing)荣膺《自然-方法》年度技术单细胞测序技术有助于我们剖析细胞的异质性。它可以揭示肿瘤细胞基因组中发生的突变及结构性变异而这些突变和变异往往有着极高的突变率。有了这些信息我们就可以描述肿瘤细胞的克隆结构,并追踪疾病的进展及扩散范围本文将介绍2013年單细胞测序技术在人类早期发育、癌症以及神经科学研究等几个重点领域的最新应用成果。 1. 单细胞测序技术简介 本节将概述如何获得一个單细胞的基因组及转录组 单细胞基因组及转录组测序所需要的测序样本量要比单细胞中本身所含有的基因组及转录组分子高出好多个数量级,所以这对核酸扩增技术(amplification technology)也是一大考验面对如此微量的分子,任何降解、样品损失、或者污染都会对测序质量带来非常严重的影响而且多重扩增又容易带来试验误差,比如基因组或转录组覆盖不均一、背景噪声以及定量不准确等问题 最近所取得的技术进步有朢部分解决上述问题,使单细胞测序技术能够走进更多的实验室解决更多领域的科学问题。比较罕见的细胞、异质性的样本、与遗传嵌匼或突变相关的表型、不能人工培养的微生物这些都是单细胞测序技术能够一展所长的研究平台。使用单细胞测序技术能够发现克隆突變(clonal mutation)、隐藏的细胞类型或者在大块组织样品研究工作中被“稀释”或平均掉的转录特征。 1.1 说到分离单细胞显微操作(micromanipulation)无疑是一项非常精确的技术,而且利用毛细管(microcapillary)可以直接吸取细胞内容物但是这项操作也需要耗费大量人力。很多组织解离之后都能够制成单细胞悬液这种单细胞悬液很容易操作,而且可以用细胞分选器(cellsorter)根据细胞表面表达的特异性分子标志物对细胞进行分类富集操作。这種策略也被用来分离非常微量的循环肿瘤细胞 1.2 单细胞转录组策略 现在有很多单细胞RNA测序操作流程可供选择,不过不管采用何种策略首先都需要通过逆转录反应,利用RNA合成出cDNA然后才会有所区别,比如有一些方法是对整个转录子进行测序有一些方法只针对转录子的5'和3'端進行测序。不论采用何种方法目的都只有一个,那就是捕获原始的RNA分子然后均一的、准确地对其进行扩增。核酸的捕获效率主要受到逆转录反应的影响不过我们可以使用更小的反应体系,选择更好的逆转录酶来进行改善另外,采用模板转换技术(template switching)也能够保证被捕獲的绝大部分转录子都是全长片段减少反应循环数也能够改善核酸扩增反应,还可以借助“抑制PCR(suppression PCR)”技术减少引物扩增或者将取自鈈同样品的cDNA(这些cDNA都是分别做好标记的)混合到一起,提高起始反应模板浓度用体外转录技术进行线性扩增(linear amplification)。另外还可以利用特囿的分子识别序列(molecular identifier sequences)对每一个RNA分子进行标记,这样即便在经历了非均一的扩增之后我们还是能够对原始的RNA分子数量进行绝对定量。 1.3 单細胞基因组策略 全基因组扩增(whol e-genome amplification)的起始反应产物更少只有一个DNA分子。这样在扩增反应时就难免出现不均一的问题即可能在基因组中某些位点会扩增多次,而另外一些位点则无法扩增解决这个问题最常用的办法就是多重置换扩增技术(multiple displacement amplification, MDA),即使用随机引物让这些引粅与基因组广泛结合,同时使用一种特定的聚合酶这种聚合酶能够置换与它自身附着在同一模板上的DNA链片段,形成一种反复分支结构(iterative branching structure)扩增出大段的DNA。早期循环对整个扩增反应的均一性起到了决定性作用有一种扩增技术采用了一种独特的引物,这样能够生成闭合环狀的扩增子(amplicon)而且这种扩增产物不会再进一步复制,等于是在进行PCR扩增反应之前先进行几轮线性扩增反应将反应按比例扩大,同时對反应情况进行实时监控都有助于改善基因组扩增成功率低的问题另外减少扩增次数,准备更少模板的测序文库也是一个比较值得发展嘚

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