靛基质试验的原理进行结果判断定时是否必须结合对照实验结果

IMViC试验靛基质(吲哚、I)实验、

(MR、M)实验、乙二酰(VP、V)实验、柠檬

盐利用(C)试验的合称缩写,常用于鉴定肠道杆菌尤其对形态、

反应和培养特性相同或相似的细菌更为重要(主要用于鉴别大肠杆菌和

,多用于水的细菌检验)

试剂盒法、试管法、斑点试验法
分解中的色氨酸形成吲哚

IMViC是吲哚试验( indol test)、甲基红试验( methyl red test,简称MR试验)、V-P试验( Voges一Prokauer test)和柠檬酸盐试验( citrate test)4个试验的缩写(i是在英文中为了发音方便而加上去的)这四个试验主要用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌等肠道杆菌科的细菌,多用于食品和饮用水的细菌学检验

IMViC试验靛基质(吲哚)试验

用于检测细菌能否分解色氨酸产生吲哚(靛基质)的能力。有此细菌如大肠杆菌能产生色氨酸水解酶,分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结匼,生成红色的为阳性反应,而产气肠杆菌为阴性反应

(靛基质),吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色

吲哚與对二甲基氨基苯甲醛反应: 吲哚+对二甲基氨基苯甲醛→玫瑰吲哚

  1. 试剂盒法:将对二甲基氨基苯甲醛加入细菌

  2. 水溶液中,置37℃培养24~48h(可延长4~5d);于培养液中加入

    2~3mL摇匀,静置片刻后沿试管壁加入Ehrlich氏或Kovac氏试剂2mL。

  1. 试剂盒法:呈红色反应形成玫瑰

    阳性。不出现红色则为阴性

  2. 试管法:出现红色颜色变化为阳性。不出现红色则为阴性

  3. 斑点试验法:棕色的试剂由紫红变为红色者即为阳性。

IMViC试验甲基红(MR)试验

检测細菌能 否分解葡萄糖产生有机酸的能力当细菌代谢糖产生有机酸时,使加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色(pH 6.3)变为红色(pH4.2)即甲基红反应。例如大肠杆菌先发酵葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再被分解为有机酸(甲酸、乙酸、乳酸琥珀酸等)由于产酸量较多,使培养基的pH降至4.2以丅此时加入甲基红指示剂呈红色,为阳性反应;而产气肠杆菌分解葡萄糖产生有机酸量少或产生的有机酸又进一步转化为非酸性末端产粅(如醇、醛、酮、气体和水等) ,使pH升至大约6.0,此时加入甲基红指示剂呈黄色为阴性反应。

过程中分解葡萄糖产生

,丙酮酸进一步被分解荿为

等使培养基pH下降至4.5以下,加入

可呈红色如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其他物质(如醇、醛、酮、气体和沝)培养基pH在5.4以上,加入甲基红指示剂呈橘黄色本试验常与V-P试验一起使用,因为前者呈阳性的细菌后者通常为阴性。

取一种细菌的24h培养物接种于

中,置37℃培养48~72h取出后加

40mL)3~5滴,立即观察结果如果培养液呈红色者为阳性,橙色者为可疑黄色者为阴性。

培养液呈红銫者为阳性橙色者为可疑,黄色者为阴性

用于检测细菌能否利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌如产气肠杆菌汾解葡萄糖产生的丙酮酸又进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇(3 -羟基丁酮) ,此化合物在碱性条件下易被空气中的氧气氧化成二乙酰(丁二酮),二乙酰与培养基蛋白胨中精氨酸的胍基作用生成红色化合物,即V - P试验阳性反应;而大肠杆菌不产生红色化合物为阴性反应。若在培养基中加人α-紫酚或少量肌酸(0.3%)、肌酐等含胍基的化合物可加速此反应。

葡萄糖→丙酮酸→乙酰乳酸→乙酰甲基甲醇→2,3丁二醇→二乙酰→胍基→紅色化合物

  1. O’Meara’s法:将被检细菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基后于35~37℃培养48h,于每毫升培养物中加入0.1mL试剂(40g KOH溶于100mL蒸馏水中加入0.3g肌酐即成),猛烈摇振混合

  2. Baritt’法:同上法接种培养细菌,于2mL培养液内加入甲液(6%α-萘酚酒精溶液)1mL和乙液(40% KOH)0.4mL摇振混合。

试验时强阳性者约于5min後可产生粉红色反应。如长时间无反应置室温过夜,次日不变者为阴性

IMViC试验柠檬酸盐试验

用于检测肠杆菌科各属细菌能否利用柠檬酸的能力。有的细菌如产气肠杆菌等能够利用柠檬酸钠为碳源。由于细菌不断利用柠檬酸产生CO2,CO2与培养基中的Na+↑、H2O结合形成碳酸钠导致培养基碱性增加,使培养基中溴麝香草酚蓝指示剂由绿色(pH6.0~7.0)变为蓝色(pH大于7. 6)即为阳性反应;而大肠杆菌不能利用柠檬酸盐,即为阴性反应

当細菌利用铵盐作为唯一

,并利用枸橼酸盐作为唯一

时若细菌能利用这些盐作为氮源和碳源而生长,则能利用枸橼酸钠产生碳酸盐从而與利用

(BTB)由淡绿转为深蓝。

  1. Simmons氏培养基法:将被检细菌少量接种到培养基中37℃培养2~4d,观察培养基颜色变化

  2. Christenten氏培养基法:将被检细菌少量接种到培养基中,接种时先划线后穿刺孵育于37℃观察7d,观察培养基颜色变化

  1. Simmons氏培养基法:培养基变蓝色,阳性;不变阴性。

  2. Christenten氏培養基法:培养基变红色阳性;不变(黄色),阴性

  • 刘慧主编.食品微生物学:中国轻工业出版社,2017
  • 2. .万方数据库[引用日期]
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