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&【求助】联合培养转学校—资助标准和留学期限问题
【求助】联合培养转学校—资助标准和留学期限问题
作者 pengliu
我是十月末刚到伦斯勒理工学院，在纽约州，Troy。到这外导说他要去哥伦比亚大学，让我也跟着去，他叫哥伦比亚大学那边的人和我联系换学校及签证的问题，哥伦比亚大学那边的人说：他们那边访问学者最长期限是一年（原在伦斯勒理工是两年），说要是额外延长期限的话，要等一年后再办理延期。还有就是资助标准，哥伦比亚大学在纽约Manhattan，最低生活标准是2000$，CSC好像只提供1700，还得让我提供额外的资金证明。哎，不知道是去还是留，请各位给个建议吧
换学校就是手续上麻烦一点吧。资助证明可以让你导师给你开一张，每月补个300刀就行了。如果不去，你留着有导师/课题/...吗？
是有点麻烦~
谁知道你外道肯不肯给你额外补助，向他要求一下
额外资助好办，让你导师写一个他愿意给你每月至少300刀的资助证明就行。至于他实际上会不会给你钱，那是另外一回事情。很多联培都是外导开资助证明，但实际并不拿钱的。当然，传说有人拿外导的资助证明sue外导的，
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【求助】求助Western半干转的电压及时间
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这个帖子发布于11年零363天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我准备做三个独立的蛋白的western,用的是半干转(仪器是YRDIMES).蛋白的分子量分别是20KD,30KD和86KD,请教各位每个蛋白的转膜的时间和电压电流多少比较合适呢?由于是第一次做,还请大家帮忙给我些经验.谢谢~~
不知道邀请谁？试试他们
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我用的是伯乐的仪器 半干转膜50KD左右恒压15V转1个小时效果还不错你应该根据你的具体情况多摸几次条件
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丁香园准中级站友
你的目的蛋白分子量相差很大，我建议：1：20和30KD的一起转，15%浓缩胶，1mm厚度，15ul上样量，恒流80mA，2小时；2：86KD单独转，10%浓缩胶，1mm厚度，15ul上样量，恒流80mA，2小时。注意：胶的浓度不一样，胶的浓度大，蛋白被电洗脱的时间相应会长。另外，转膜时间长，注意滤纸、膜及胶要经电转液充分浸泡，防止转膜过程中干胶及干膜。我认为，恒流较恒压转膜效率更高。
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多谢各位,我会参考你们的建议摸摸条件~~
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分子量120kDa,转膜条件求助最近一个月,蛋白一直做不顺,蛋白分子量120KD,转膜时间2H~半干转：切NC膜4.5cm*1.5cm,转膜电流7mA,2h~转完染膜染胶,上面什么都没有湿转：NC膜 转膜电流250mA,2h~转完染膜染胶都有蛋白,还要再延长时间么……加到250mA~300mA,还是没做出来；PVDF膜,300mA 2h,试了两次,之前用甲醇泡过15-20min激活的,膜有点花,转完膜染胶还是有残留,染膜没怎么看到蛋白,也有注意用冰袋降温了……marker转膜完能看到,脱脂牛奶封闭2h以后膜的颜色不花了,但是marker看不清楚了……之后一抗santa 1:200 4℃过夜,二扛ICL 1:5000β-actin用半干转一直都很好,总感觉目的条带不出来可能问题在转膜上,1、我的转膜条件是不是有问题,如果是,需要怎么调整?2、湿转液配的时候,120KD需要加SDS么?
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我用的是湿转,我跑分子量130的.没有加SDS.用的是PVDF膜,甲醇活化一般只用半分钟到一分钟,就放入去离子水中泡着待用了.转膜时,是恒流300mA,基本就转1.5-2h.一般没问题的呀.我觉得你检查一下你的转膜缓冲液（我一般不重复用）,还有就是铺膜有没有气泡.另外实在找不到原因可以适当延长转膜时间,但也不可以太长.其实120KD转两小时足够了.另外,我有时封闭后也会marker看不清楚,影响不大,只要还能辨别marker的条带就ok了.
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