& [求助]做CCK-8时几个小疑问，请高手帮忙解答一下
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[求助]做CCK-8时几个小疑问，请高手帮忙解答一下
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[求助]做CCK-8时几个小疑问，请高手帮忙解答一下
我刚开始做实验，都不是很熟练，遇到几个问题，请大家帮忙看一下，先谢过了：
1.每次加药就10ul，感觉就一点点，手抖得厉害，一不小心就挂在壁上了。请问有什么方法可以帮我一下吗？
2.因为操作不熟练，所以加药的时间特别长，不知道对最后的测量值有没有影响。
3.说明书上写OD值在1-2之间比较可靠，请问这在实际中是不是对各种细胞都是适用的。
非常感谢！
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1，拿水和废板子练一下手，10微升还是很多的，我们还要1ul加药呢。挂到壁上可以轻轻拍拍，晃一下，不过不要晃出来了。加的时候不要加入气泡。
2，影响应该有，但是不至于太大，加完放到37度开始脱氢酶的反映才会很快。一般一个板子5分钟以内加完就好了。最好不要长过10分钟。
3，各种细胞都适用，实际每种细胞最好摸一下种板密度（/96板孔）。读数大小和cc-8反映时间成正比，有的细胞加入进去1小时就值很高了，有的需要4个小时甚至更长时间。具体视实际情况。一般在1.2-1.5比较好。在0.9-2之间都还可以吧。因为空白培养基都可能0.2-0.3之间。
非高手，用cck-8也不久，初级者回答初级者的问题也许更详细，希望对你有用。这个cck-8我也刚刚用了几个月，很快你就熟了。
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非常感谢！说实话，我前面做的这个试验挺惨烈的。加CCK加到一半枪还坏了！郁闷死人！我们开始做的是5000，结果出来的IC50根本不行，于是做，加上我的笨鸟技术，孔里基本上就没剩下几个细胞了。。。。。。
多谢回答，我再勤加练习吧！谢谢！：）
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请问一下，您的细胞是贴壁细胞还是悬浮细胞啊，悬浮细胞一般多长时间测比较合适啊？我第一次做这个，谢谢你
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我也是 第一次做，遇到了和楼主一样的问题
我的OD值普遍在1.5-2.5之间，有时还 到3.0多，密度摸了几次好像都差不多，我现在种的是5000/well,是悬浮细胞，但结果很糟糕~
还有就是CCK-8真的好贵哦，一枪下去2元钱呢 ~~~~~~
请各位大侠指导
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请问做CCK8是一定要用490nm的波长吗？
我么实验室是590的，而且我不知道怎么调啊？
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CCK-8要用450的波长啊，说明书上写得很清楚啊，同时参比波长要设到600或以上。seaky_2001910，你不要告诉大家你做CCK-8都是用490测的。。。。。。
说明书上还讲OD值在1-2之间是最好的，超过2可能大了些，也许是你培养的时间太长了吧。我种的是PANC-1，摸了好几次觉得4000的最好，不过结果还没给老板看，等他看了再说吧。是挺贵的，我第一次没有细胞还加了结果被老板训了一顿，郁闷了一晚上。
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我前几天做了一下，结果不太好，有几个问题想问一下：
1、说明书上：I do not have a 450 nm filter. What other filters
can I use? You can use filters with the absorbance between 450
and 490 nm, even though 450 nm filter gives the best
sensitivity.我们实验室没有450NM，我只能用490的，郁闷哪。
2、一定要有参比波长吗？为什么呀？
3，我加完药之后一段时间，发现孔内中心的细胞都死好多，但是边上的细胞还是特别多，是不是加药加的均匀啊？怎么样才能加均匀呢？
4、我的是悬浮细胞，密度是10的5次方每孔，好像有点大了一样，不知道你的是什么细胞啊？
谢谢，祝大家试验都顺利！
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参比波长是为了去除其它颜色物质的影响，感觉做cck或者elisa这种不用参比波长可能结果不会差异太大。
悬浮没做过 呵呵 我做贴壁细胞
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1，一般是450nm测，650nm参考，以450-650作为真实值。原因就是diving战友说的去除其他物质的影响。
2， 我做的主要是贴壁细胞，同实验室的有做悬浮细胞，也有panc-1，貌似是5000/孔。
3，刚开始加96孔板的时候，细胞比较容易贴到孔周围，后来发现这种现象减轻了，可能是操作更熟练的缘故，自己也可以再摸索一下方式。孔周围总是比中间多，这是正常。
3，加药后可以用抢轻轻混匀，刚开始我也不敢吹，怕把贴壁细胞吹起来。后来发现没事。不过，最终我还是采取横竖方向各轻轻拍板50-100次，用枪头又浪费又慢。完全不吹不晃的话，加入的1-2微升DMSO容易沉到底下，造成一小片细胞死亡。
4，关于怕浪费不起cck-8的问题，我们新手可以这样克服：如果显微镜下看见你的细胞长的过满，或者肉眼无见明显梯度死亡（本来有用的药，比如对照药反而无效或者杀死过多等）或者预感结果不太好（不符合预期），可以用mtt或者mts（这个是490测值，楼上那位不妨考虑下，就是要避光，数值不如cck-8稳定）等代替测，实在不行，拍照数数活细胞也可以考虑。如果肉眼观察都不满意，何苦浪费试剂（可惜我是浪费了很多之后才知道这句话，知道了这句话时候我也无需浪费了，哈哈）。
5，做之前，最好摸一下细胞密度（一般细胞5000就ok，我有些细胞长4天才满，所以用了10000，后来都改成5000了），值偏大时可以减少种板细胞数，也可以减少cck-8作用时间，如我们的细胞中有的要加cck-84个小时做，有的一个小时值就老高了。刚开始如果不知道什么时候测合适，就一个小时测一次，快点测完后拿回去。一般熟练后肉眼看颜色就知道值大概有多少了。各种细胞不同，不可一概而论。
祝各位尽早获得好结果~当前位置：
LOL7.1版本野区再洗牌 新版本野区改动解读
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来源： &&&
从LOLS7季前赛的版本开始，英雄联盟的野区就一直是设计师修改的重点，S6与S7野区差距是巨大的，设计师也是在不断的摸索与尝试的挑战野区来制衡一些过于强大的打野英雄，在即将到来的7.1版本，野区又是有了改动，下面小编给大家新版本野区改动解读。7.1野区改动解读锋喙鸟原来的F4摇身一变成了F6，而这组野怪的强大程度想必各位都已经是尝试过了，死在它们手下的召唤师数不胜数，然而清理这组野怪的难度却与收益不成正比，这也使得绝大多数的打野玩家在前期会不选择这组野怪。在7.1版本中其经验也是有所上升，大锋喙鸟：15上升到20，小锋喙鸟：15上升到35。也就是说，这组野怪的经验较之前上升了105，翻了个倍还多，这也使得这组野怪的受重视程度必将上升。石甲虫石甲虫可谓是S7季前赛版本中野区的王者，收益是最大的，之前更是有Buff+石甲虫后直接3级的套路，6.24的改动使这个套路失效，但是依旧不能阻止这组野怪的强大收益，一旦这组野怪被反，双方打野将会拉开巨大的差距。在7.1版本的改动中，中石甲虫的经验由45降到35，小石甲虫的经验由15降到7。经验的调整也是让这组野怪的收益降低，不会再出现一方打野非常顺的情况下，等级甚至比上单还要高出两三级的情况。红蓝BUFF及魔沼蛙的经验均是从210降低到200,并且现在除了BUFF怪外的第一波野怪获得经验减少25%。野区改动解读：第一：在S7季前赛中，打野的表现过于强力了，一些地图元素以及野区经验经济的剧增，使得打野位成为上分的最佳选择，打野的Carry能力大大加强，很多职业选手大呼：ADC太弱势了，打野太强势了。第二：我们在一些分段较高的对局中，经常可以看到一个明明没有很多人头的打野，但是他的等级与装备甚至可以碾压线上的玩家，尤其是等级，这在S6是不常见的，但是S7野区经验的剧增造成了这一情况。第三：而在7.1版本中，各组野怪经验的平衡也是使得这类情况会变得少一些，敌我打野的差距也不会因为一些失误以及英雄的强势与否拉的过大。第四：除Buff怪以外的第一波野怪经验都是下降了25%，这也就是说即使有着打野刀的经验加成，打野也只能通过Buff怪开来保证自己顺利升2，这倒是没有什么影响，但是后续的刷野是有着巨大的影响的，第一波野怪经验的降低也是减缓了打野gank 的节奏，要知道在前期等级是至关重要的，每高一级战斗力都有很大的成长。7.1野区如何玩我们还是先来看一下7.1版本野怪提供的经济与经验经济野区经济没有改动，依旧是跟季前赛版本一样。经验野区的总经济与总经验其实是与之前没有太大差别的，但是第一波野怪经验值的下降，致使一些想要速刷到6的打野变得有些困难，但是之后没有太大的差别，每一组野怪都是非常重要的，一旦被反损失巨大。打野在反野的时候，石甲虫的首选度不再那么高，而一些攻击性较强的打野也将会gank付出更多的代价，你补等级不再是刷刷石甲虫这类高经验的野怪就行了，现在野区所有野怪的经验都是趋于平衡的，需要刷完整片野区才能使经验迅速提升，这也让一些清野效率高的打野更加的吃香。那么7.1版本开局该如何刷野呢，小编为各位推荐一下线路。首先Buff开没有任何的疑问，而且在打第一个Buff的时候是不交惩戒的，下路完全可以帮你多打而不损失兵线的。之后立刻赶去另外一个Buff处，不说Buff提供的增益，单单是其经验的收益都是第一波野怪中最高的，一旦被反等级会有差距，所以你需要让你方上单留意一下你的野区。F6是比较难打的，不建议没有AOE技能的打野在前期选择，会非常伤，会让你没有办法继续刷野，状态不好被打死也不是没可能。河道蟹是非常需要重视的地图资源，可以给两路的线上队友很不错的视野，并且不会还手的它提供的经济与经验都是不错的，还能帮助一些有吸血手段的英雄回复状态。在你gank之前，最好能够刷完己方的野区，野区的经济与经验都是不能忽视的，其实野区的改动不仅是对于打野有着影响，对于中单同样如此。F6经验的大幅度提升，使得一些刷子型中单能够更快的发育成型，来到自己的强势期，接下来，笔者为各位推荐几个7.1版本可以尝试去使用的中野英雄。结语7.1野区的改动看似只是野怪经验的转移平衡，但是这也是影响这很多的东西，不仅是对于打野，对于中单同样是重要的，野区的改动会让一批英雄兴起，同时也伴随着一批英雄的沉寂。希望本文对各位有所帮助，最后祝大家游戏愉快。
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lol美图欣赏& 知识点 & “某汽车品牌推出一款SUV车型，公司指导销...”习题详情
0位同学学习过此题，做题成功率0%
某汽车品牌推出一款SUV车型，公司指导销售价为20万元/辆．但由于产品市场反应良好，供不应求，多年来该汽车品牌经销商及4S店一直采用加价提车的销售模式，即购车花费=指导销售价+加价提车费．通常，一款新车从进入市场，被市场认可，最后被新产品所淘汰的生产销售过程约为10年．据专家估计，此SUV车型在A地1至10年的销售数量p（辆）与年份x满足函数关系式p=100xo（1≤x≤10，且x取整数）．据以往市场经验，该地区加价提车费y（万元/辆）与年份x（1≤x≤10，且x取整数）满足的函数关系如下表：
加价费y（万元/辆）
（1）请观察题中的表格，用所学过的一次函数、反比例函数或二次函数的有关知识，求出y与x之间的函数关系多； （2）求该车型1至10年内，在A地的销售额W（万元）与x（年）之间的函数关系式，并求出哪年的销售额最大，且最大销售额是多少万元？ （3）天有不测风云，第6年国际原油价格上涨，影响消费者的购买需求，该SUV车型出现较大库存．为扭转局面，应对危机，公司决定第7年起将指导销售价在原有基础上减少0.5a%，A地经销商及4S店也推出提车加价费打八折的活动，结果当年A地的销售数量比预期提高2a%，从而实现了A地第7年107800万元的销售额．请你参考以下数据，估算出整数a的值（0＜a＜10）．（71.42≈.52≈.62≈.72≈5140.89）　&
本题难度：
题型：解答题&|&来源：网络
分析与解答
习题“某汽车品牌推出一款SUV车型，公司指导销售价为20万元/辆．但由于产品市场反应良好，供不应求，多年来该汽车品牌经销商及4S店一直采用加价提车的销售模式，即购车花费=指导销售价+加价提车费．通常，一款新车从进入市...”的分析与解答如下所示：
（1）根据当1≤x≤6时，y与x成反比例函数关系，当7≤x≤10时，y=0.5，分别求出即可； （2）①当1≤x≤6，且x取整数时，W=po（20+y）=100xo（20+
），②当7≤x≤10，且x取整数时，W=p（20+y）分别求出即可； （3）当x=7时，P=100×7×7=4900，由题意得出：销售价×销量=销售额得出[20+0.5×0.8]×a%）=107800，进而求出即可．
解：（1）经观察得出：当1≤x≤6时，y与x成反比例函数关系，设y=
∵x=1时，y=3，∴k=3×1=3，∴y=
， 当7≤x≤10时，y=0.5， ∴y=
(1≤x≤6，且x取整数)
0.5(7≤x≤10，且x取整数)
， 经验证，表中其余各组数值均符合该函数关系；
（2）由题意得出： ①当1≤x≤6，且x取整数时， W=po（20+y）=100xo（20+
）=-2000x2+2， ∵-
=6.925，不是整数， ∴x=6时，W有最大值=98400； ②当7≤x≤10，且x取整数时，W=p（20+y）=100x（20+0.5）=-2050x2+28700x， ∵-
=7，∴x=7时，W有最大值=100450， ∵400， ∴x=7时，W有最大值， 答：当第7年，可获得最大销售额100450万元．
（3）当x=7时，P=100×7×7=4900， 由题意得出：[20+0.5×0.8]×a%）=107800， ∴（20.4-10a%）（1+2a%）=22， 设a%=t，经整理得出：50t2-77t+4=0， ∵△=77 2-4×50×4=5129， ∴t=
≈0.054， ∴t2=
≈1.486（不合题意舍去）， ∴a=100t=5.4≈5， 故a=5．
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某汽车品牌推出一款SUV车型，公司指导销售价为20万元/辆．但由于产品市场反应良好，供不应求，多年来该汽车品牌经销商及4S店一直采用加价提车的销售模式，即购车花费=指导销售价+加价提车费．通常，一款新...
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经过分析，习题“某汽车品牌推出一款SUV车型，公司指导销售价为20万元/辆．但由于产品市场反应良好，供不应求，多年来该汽车品牌经销商及4S店一直采用加价提车的销售模式，即购车花费=指导销售价+加价提车费．通常，一款新车从进入市...”主要考察你对“26.3 实际问题与二次函数”
等考点的理解。
因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
26.3 实际问题与二次函数
与“某汽车品牌推出一款SUV车型，公司指导销售价为20万元/辆．但由于产品市场反应良好，供不应求，多年来该汽车品牌经销商及4S店一直采用加价提车的销售模式，即购车花费=指导销售价+加价提车费．通常，一款新车从进入市...”相似的题目：
在直角坐标系中，y=x2+ax+2a与x轴交于A，B两点，点E（2，0）绕点O顺时针旋转90°后的对应点C在此抛物线上，点P（4，2）． （1）求抛物线解析式； （2）如图1，点F是线段AC上一动点，作矩形FC1B1A1，使C1在CB上，B1，A1在AB上，设线段A1F的长为a，求矩形FC1B1A1的面积S与a的函数关系式，并求S的最大值； （3）如图2，在（1）的抛物线上是否存在两个点M，N，使以O，M，N，P为顶点的四边形是平行四边形？若存在，求出点M，N的坐标；若不存在，请说明理由．&&&&
如图，坐标系的原点为O，点P是第一象限内抛物线y=
x2-1上的任意一点，PA⊥x轴于点A．则OP-PA=&&&&．
已知抛物线y=x2+bx-c与x轴两交点的坐标分别为A（m，0），B（m＜0）． （1）证明：b2+4c＞0； （2）证明：4c=3b2； （3）若该函数图象与y轴相交于点C，且△ABC的面积为6，求这个二次函数的最小值．&&&&
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欢迎来到乐乐题库，查看习题“某汽车品牌推出一款SUV车型，公司指导销售价为20万元/辆．但由于产品市场反应良好，供不应求，多年来该汽车品牌经销商及4S店一直采用加价提车的销售模式，即购车花费=指导销售价+加价提车费．通常，一款新车从进入市场，被市场认可，最后被新产品所淘汰的生产销售过程约为10年．据专家估计，此SUV车型在A地1至10年的销售数量p（辆）与年份x满足函数关系式p=100xo（1≤x≤10，且x取整数）．据以往市场经验，该地区加价提车费y（万元/辆）与年份x（1≤x≤10，且x取整数）满足的函数关系如下表：
加价费y（万元/辆）
（1）请观察题中的表格，用所学过的一次函数、反比例函数或二次函数的有关知识，求出y与x之间的函数关系多； （2）求该车型1至10年内，在A地的销售额W（万元）与x（年）之间的函数关系式，并求出哪年的销售额最大，且最大销售额是多少万元？ （3）天有不测风云，第6年国际原油价格上涨，影响消费者的购买需求，该SUV车型出现较大库存．为扭转局面，应对危机，公司决定第7年起将指导销售价在原有基础上减少0.5a%，A地经销商及4S店也推出提车加价费打八折的活动，结果当年A地的销售数量比预期提高2a%，从而实现了A地第7年107800万元的销售额．请你参考以下数据，估算出整数a的值（0＜a＜10）．（71.42≈.52≈.62≈.72≈5140.89）”的答案、考点梳理，并查找与习题“某汽车品牌推出一款SUV车型，公司指导销售价为20万元/辆．但由于产品市场反应良好，供不应求，多年来该汽车品牌经销商及4S店一直采用加价提车的销售模式，即购车花费=指导销售价+加价提车费．通常，一款新车从进入市场，被市场认可，最后被新产品所淘汰的生产销售过程约为10年．据专家估计，此SUV车型在A地1至10年的销售数量p（辆）与年份x满足函数关系式p=100xo（1≤x≤10，且x取整数）．据以往市场经验，该地区加价提车费y（万元/辆）与年份x（1≤x≤10，且x取整数）满足的函数关系如下表：
加价费y（万元/辆）
（1）请观察题中的表格，用所学过的一次函数、反比例函数或二次函数的有关知识，求出y与x之间的函数关系多； （2）求该车型1至10年内，在A地的销售额W（万元）与x（年）之间的函数关系式，并求出哪年的销售额最大，且最大销售额是多少万元？ （3）天有不测风云，第6年国际原油价格上涨，影响消费者的购买需求，该SUV车型出现较大库存．为扭转局面，应对危机，公司决定第7年起将指导销售价在原有基础上减少0.5a%，A地经销商及4S店也推出提车加价费打八折的活动，结果当年A地的销售数量比预期提高2a%，从而实现了A地第7年107800万元的销售额．请你参考以下数据，估算出整数a的值（0＜a＜10）．（71.42≈.52≈.62≈.72≈5140.89）”相似的习题。由中两根之和与两根之积的结果可以看出,两根之和正好等于一次项系数与二次项系数之比的相反数,两根之积正好等于常数项与二次项系数之比.欲求的值,先把代数式变形为两根之积或两根之和的形式,然后与两根之和公式,两根之积公式联立组成方程组,解方程组即可求值.
猜想为:设的两根为,,则有,.理由:设,是一元二次方程的两根,那么由求根公式可知,,.于是有,,综上得,设的两根为,,则有,.,是方程的两个实数根,,又整理得,解得或,又,解得,.
本题考查了学生的总结和分析能力,善于总结,善于发现,学会分析是学好数学必备的能力.将根与系数的关系与代数式变形相结合解题是一种经常使用的解题方法.
3746@@3@@@@根与系数的关系@@@@@@248@@Math@@Junior@@$248@@2@@@@一元二次方程@@@@@@50@@Math@@Junior@@$50@@1@@@@方程与不等式@@@@@@7@@Math@@Junior@@$7@@0@@@@初中数学@@@@@@-1@@Math@@Junior@@$3742@@3@@@@解一元二次方程-公式法@@@@@@248@@Math@@Junior@@$248@@2@@@@一元二次方程@@@@@@50@@Math@@Junior@@$50@@1@@@@方程与不等式@@@@@@7@@Math@@Junior@@$7@@0@@@@初中数学@@@@@@-1@@Math@@Junior@@$3743@@3@@@@解一元二次方程-因式分解法@@@@@@248@@Math@@Junior@@$248@@2@@@@一元二次方程@@@@@@50@@Math@@Junior@@$50@@1@@@@方程与不等式@@@@@@7@@Math@@Junior@@$7@@0@@@@初中数学@@@@@@-1@@Math@@Junior@@$3745@@3@@@@根的判别式@@@@@@248@@Math@@Junior@@$248@@2@@@@一元二次方程@@@@@@50@@Math@@Junior@@$50@@1@@@@方程与不等式@@@@@@7@@Math@@Junior@@$7@@0@@@@初中数学@@@@@@-1@@Math@@Junior@@
@@50@@7##@@50@@7##@@50@@7##@@50@@7
第二大题，第26小题
第一大题，第1小题
第三大题，第12小题
第一大题，第22小题
第三大题，第8小题
第三大题，第8小题
第三大题，第8小题
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第一大题，第23小题
第一大题，第22小题
求解答 学习搜索引擎 | 阅读并解答:\textcircled{1}方程{{x}^{2}}-2x+1=0的根是{{x}_{1}}={{x}_{2}}=1,则有{{x}_{1}}+{{x}_{2}}=2,{{x}_{1}}{{x}_{2}}=1.\textcircled{2}方程{{x}^{2}}-x-2=0的根是{{x}_{1}}=\frac{1+\sqrt{17}}{4},{{x}_{2}}=\frac{1-\sqrt{17}}{4},则有{{x}_{1}}+{{x}_{2}}=\frac{1}{2},{{x}_{1}}{{x}_{2}}=-1.\textcircled{3}方程3{{x}^{2}}+4x-7=0的根是{{x}_{1}}=-\frac{7}{3},{{x}_{2}}=1,则有{{x}_{1}}+{{x}_{2}}=-\frac{4}{3},{{x}_{1}}{{x}_{2}}=-\frac{7}{3}.(1)根据以上\textcircled{1}\textcircled{2}\textcircled{3}请你猜想:如果关于x的一元二次方程a{{x}^{2}}+bx+c=0(a不等于0)有两个实数根为{{x}_{1}},{{x}_{2}},那么{{x}_{1}},{{x}_{2}}与系数a,b,c有什么关系?请写出你的猜想并证明你的猜想;(2)利用你的猜想结论,解决下面的问题:已知关于x的方程{{x}^{2}}+(2k+1)x+{{k}^{2}}-2=0有实数根{{x}_{1}},{{x}_{2}},且{{{x}_{1}}^{2}}+{{{x}_{2}}^{2}}=11},求k的值.}