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1------------------------------ ·１６５６·
中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１５Ｄｅｃ；３１（１２）：１６５６～６０ 网络出版时间：２０１５－１１－２４１１：００　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０１５１１２４．１１００．０１４．ｈｔｍｌ ◇论　　著◇
心脏干细胞分泌的ｅｘｏｓｏｍｅ
对氧化应激下心肌细胞的保护作用研究
肖　静 ，潘　宇 ，李晓红 ，姜　霖 ，杨翔宇 ，吴岳恒 ，雷和平 ，余细勇
（１?南方医科大学药学院，广东广州　５１０５１５；２?广东省人民医院广东省医学科学院，广东广州　５１００８０） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１５．１２．００７ 组织。研究表明，心肌损伤后心肌组织中的心脏干 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１５）１２－１６５６－０５
细胞（ｃａｒｄｉａｃｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ，ＣＰＣｓ）在心肌修复过程 中国图书分类号：Ｒ３３２．１１；Ｒ３２９．２５；Ｒ３４９．１；Ｒ５４２．２；Ｒ９７７．６ 中发挥着不可忽视的作用，但是，ＣＰＣｓ的再生能力 摘要：目的　探索心脏干细胞分泌的外泌体（ｅｘｏｓｏｍｅ）对体
有限，其发挥作用的一个重要途径就是通过旁分泌 外氧化应激所致心肌细胞凋亡的保护作用。方法　磁珠分
作用，外泌体（ｅｘｏｓｏｍｅ，Ｅｘｏ）便是心肌缺血保护作用 选出Ｓｃａ?１ＣＰＣｓ进行培养，流式细胞术鉴定；分离 ＣＰＣｓ分
中的重要旁分泌因子。Ｅｘｏｓｏｍｅ是一种具有脂质双 泌的ｅｘｏｓｏｍｅ，并用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ进行表型鉴定和用Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ 进行粒径分析；免疫荧光法及ＰＫＨ２６标记技术观察心肌细
分子层结构的囊泡，直径在３０～１００ｎｍ，其内部包 胞Ｈ９ｃ２对ｅｘｏｓｏｍｅ的摄取作用；通过 ＨＯ 处理诱导 Ｈ９ｃ２
裹着许多蛋白质、ｍＲＮＡｓ、非编码 ＲＮＡ等物质，参
２ ２ 细胞凋亡，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测对照组与 ＣＰＣ?ｅｘｏ处理组凋
与细胞与细胞之间的信号传导。在心肌组织中， 亡相关蛋白水平，观察 ｅｘｏｓｏｍｅ对心肌细胞凋亡的保护作
ＣＰＣｓ来源的ｅｘｏｓｏｍｅ可以携带一些重要物质的传 用。结果　 磁珠分选出的细胞用免疫荧光检测发现Ｓｃａ?１
递到临近心肌细胞，发挥心肌缺血保护的重要作用。
＋ 呈阳性表达，且纯度可达９５％以上。 从 Ｓｃａ?１ＣＰＣｓ细胞
但是，Ｓｃａ?１ＣＰＣ?ｅｘｏｓｏｍｅ对于过氧化氢（ＨＯ）诱
２ ２ 培养上清中提取出的ｅｘｏｓｏｍｅ其表面标记蛋白ＣＤ６３呈阳性
导的心肌细胞的氧化应激损伤是否具有保护作用尚 表达，Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ结果显示大部分粒子都处于（８２?３３±３?０６）
未见报道。因此，本研究主要通过体外分离出小鼠 ｎｍ（ｎ＝３）。免疫荧光显示Ｈ９ｃ２细胞中可见大量ＰＫＨ２６标 记的ｅｘｏｓｏｍｅ在胞质聚集。 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，与对照
的ＣＰＣｓ，建立 ＣＰＣｓ分泌的ｅｘｏｓｏｍｅ的成熟分离方
③ 组相比，ＣＰＣ?ｅｘｏ处理组总的ｃａｓｐａｓｅ?３表达不变，而激活型
法，同时构建心肌细胞氧化应激模型，
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