求大神帮忙分析下SDS-PAGE胶结果 - 实验交流 - 生物秀
标题: 求大神帮忙分析下SDS-PAGE胶结果
摘要: [求大神帮忙分析下SDS-PAGE胶结果] 这是我跑的一个PAGE胶图，不知道为什么泳道里的背景色洗不掉。是杂蛋白含量太高了吗？还是怎么回事？大家帮忙分析下，谢谢了！ 关键词:[稀释 SDS-PAGE 上清 点样 蛋白含量 脱色 缓冲液]……
这是我跑的一个PAGE胶图，不知道为什么泳道里的背景色洗不掉。是杂蛋白含量太高了吗？
还是怎么回事？大家帮忙分析下，谢谢了！
回复1，点样前可高速离心。
2，请减少上样量。染色后可以脱色（或者用清水浸泡几个小时）后再照相。回复可能上样中有沉淀，上样前离心下，上样不要吸到沉淀
也可能蛋白量太大，上样量少一点回复上样量太大了，直接减半试试回复你跑的胶很拖，MARKER没有问题，就说明是你的样品的原因。
有可能是你上样量太大，介意再用Buffer稀释样品，或者直接减少上样量。
上样前介意加热5-10min后，离心，再去上清上样。回复一个原因是样品没混匀，另外上样的蛋白浓度太高，样品稀释数倍后再上样，也许结果会好点，祝好运:hand:回复电参数有点大 或者 放少了 使得你的条带跳舞一样的，回复首要的是要减少上样量吧。另外上样前离心一下可能有好处。回复上的蛋白样品太浓了，应该稀释一下。另外电压可能有些大，或是电流不稳定，建议一直用80伏跑。回复建议离心后，取上清；另外蛋白样品太浓了，应该稀释一下。建议开始用80伏跑，压成一条线后再用160V跑回复你下次可以这样试一试：你的样品和上样buffer混合的时候按1:3或者1:5的加！看胶条貌似蛋白浓度太高了，用buffer做个稀释！回复胶没问题，第一，上样量太多第二，你的样品可能没有处理干净蛋白不纯，是不是串孔了回复希望LZ提供以下后续报道，我想知道到底是什么原因造成的。先谢谢了！:tuzi25:回复
希望LZ提供以下后续报道，我想知道到底是什么原因造成的。先谢谢了！:tuzi25: 我上样前离了下心，感觉好多了。回复
我上样前离了下心，感觉好多了。... 能否麻烦上传个图！呵呵，谢谢!:tuzi10:
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电话：021-我跑的sds-page,样品为何往上飘? - 实验交流 - 生物秀
标题: 我跑的sds-page,样品为何往上飘?
摘要: 我跑的sds-page,样品为何往上飘?我在跑变性电泳时,加入样品后,样品总往上飘,这是怎么回事?跑非变性电泳时就没这回事 有人遇到这种情况么?帮我分析分析好吗? 关键词:[电泳]……
我在跑变性电泳时,加入样品后,样品总往上飘,这是怎么回事?跑非变性电泳时就没这回事.有人遇到这种情况么?帮我分析分析好吗?回复:
可以在样品中加入少量甘油 ，回复:
40％的蔗糖也可以回复:
谢谢大家,但我觉得不是甘油的问题,我加了甘油.我还没找到问题的所在,苦恼!回复:
加40％的甘油（总体积）回复:
什么时候上飘的，如果是加载电压以后的话。是不是电极搞错了，如果不是的话。你可以把甘油的量稍微加大，但是记住要沸水变性后上样。原来我做的时候尝试过不加热，结果样品有点上飘。愚人之见。呵呵，以后多交流！谢谢回复:
样品太轻！
建议加大甘油的用量，并考虑缓冲液的配制是否恰当。回复:
谢谢大家的帮忙,我是在接电源之前加样,加到最后时前面加过样的孔中样品已经快飘完了.是加上上样缓冲液后再沸水变性吗?我一般煮十分钟.上样缓冲液中甘油的量大约是40%,应该没错.我现在也觉得是电极缓冲液的时,有人能给我提供个电极缓冲液的配方吗?谢谢!!!!!!回复:
你加样的时候枪头应该向下倾斜。我一般是在加样太多时就出现样向上飘的情形。另外，看看你的上样孔有没有堵住，要是堵住了，就很难上进去了。以后多交流哦！回复:
没有加甘油吧?
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电话：021-君，已阅读到文档的结尾了呢~~
加入溶液 p3后应该立即混匀,以免产生 sds的局部沉淀,如果上清中还有飘浮
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加入溶液 p3后应该立即混匀,以免产生 sds的局部沉淀,如果上清中还有飘浮
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3秒自动关闭窗口做sds-page电泳时有一步是要将样本煮沸低温离心的,请问这一步有什么用另外,我这里没有一些配料,所有就用的琼脂糖凝胶混入一些sds,跑出来的条带里有拖尾现象,而且没有跑出单个条带来、不知道是那里出了问题.琼脂糖的浓度是3.5%,里面sds是0.1%
将样品煮沸是为了使蛋白变性,离心是去除样品中没有溶解的东西,避免带出现纹理现象.
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