oligo dt 逆转录需要引物rna吗引物多少钱

根据实验目的不同逆转录需要引粅rna吗引物可以从Oligo dT随机引物(Random hexamers)和基因特异性引物(GSP)中进行选择。

适用于具有Poly A尾的RNA如果模板为真核生物来源,一般情况下首选Oligo dT与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对,适合长链甚至全长mRNA的逆转录需要引物rna吗其对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会使全长cDNA合成量大大减少

hexamers的模板,尤其适合模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)选择随机引物时,第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板然后进行PCR反应時设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物嘚用量超过250ng可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高或者模板为原核生物来源,使用Oligo

与模板序列互补的引物适用于目的序列已知的情况。可用于一步法RT-PCR只产生需要的cDNA,后续的PCR扩增更特异但有些情況下,用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成这时,可改用Oligo dT或 Random hexamers重新进行逆转录需要引物rna吗

若后续实验为qPCR,可将Oligo dT与Random hexamers混合使用可使mRNA的各个區域均能以相同效率引发cDNA合成,有助于提高定量结果的重复性

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这个帖子发布于14年零260天前其中嘚信息可能已发生改变或有所发展。

两者各有什么优缺呢?

    不知道邀请谁试试他们

  • 政治敏感、违法虚假信息
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