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GBT 5 淡水鱼类检疫方法第一部分中华人民共和国国家标准 of 传染性造血器官坏死病(、病毒性出血性败血症(斑点叉尾鲍病毒病((鲤春病毒病((疖疮病、弧菌病和昏眩病的检疫方法。本标准适用于口岸进口国外淡水鱼类的检疫，也适用于我国国内地区间同种疾病的检疫。2设备和器械检疫中所用设备和器械除根据各个学科有特殊要求外，均指鱼病实验室常用的设备和器械。3传染性胰坏死病(称病病原属双链病流行于美洲、欧洲和亚洲。主要感染对象是鱼龄6个月以内的虹缚、美洲红点蛙等蛙缚鱼类。6个月以上的鱼可以是无症状的带病毒鱼，鱼卵也可携带病毒。作垂直回转游动，不久便沉人底部死亡。从开始回转游动到死亡的时间为1有水流的饲养池中可见失去游泳能力的鱼随水流贴在排水口的拦网上。球突出，腹部膨胀。腹壁和鳍基部有出血现象。病鱼多从肛门排出线状粘液样粪便。脏和脾脏显著褪色，通常消化道内无食物，胃和肠前部积有乳白色粘液而肿胀。净工作台、恒温培养箱、低温冰箱(一30 0C )、液氮罐、赛氏漏斗和。3,胞培养瓶、白色橡皮塞等。酶二胺四乙酸)混合消化液、小牛血清,酸氢钠、酒精。细胞生长液等配制方法见附录A(补充件)。批准实施 195传染性胰坏死病毒用和20 C。选择生长良好，形成单层的细胞培养物，倒去生长液加人适量胰酶后补加生长液，按1:2或1:3的分种率将原瓶消化的细胞分装入2个或3个培养瓶中，置适温中继续培养，当单层致密度达80%左右，即可用于病毒接种。增加冷冻离心机和1,2 酸缓冲盐水〔配制方法见附录A(补充件)」。10尾以上样品作病毒分离用。无症状的鱼，取60尾以上样品作病毒分离用。对鱼卵，取60^于少量进出口成鱼，从尾动脉抽1-2 血浆作病毒分离用，血清作抗体检测。、脾。仔、稚鱼取鱼体全部，若是带卵黄囊的鱼应去掉卵黄囊。鱼卵则取全卵。将上述待检样品称重，加磷酸缓冲盐水((浆，并稀释成10-'，离心30 000 r/弃去沉淀物，将上清液通过。后再用成样品。血液样品置于常温下1放在4℃下12析出血清。然后低速离心，其沉淀作待检样品，按上述方法制备样品液，血清作中和试验。后接种样品液，接种量为维持液的10-',吸附1细胞维持液培养，同时设对照。)培养温度是15培养过程中每日观察细胞变化情况，观察7养2^-5 出现明显的细胞致病变作用((主要特征为细胞崩解，细胞单层破坏。收集阳性细胞悬液，冻融一次后，低速离心除去细胞碎片，上清液作病毒鉴定用。若接种后7判断为阴性结果。若7需将该瓶细胞培养液作为接种材料再接种一次，定血清用量—稀释病毒法)本试验用于鉴定在细胞培养中出现了细胞代后制成病毒悬液。的标准血清，使用前于56℃灭活60 现了融一次，除去细胞碎片后使用。作系列稀释，使其稀释度由10二到10管含量为。. 5 2 后第一一一一叫一一一一‘二排管加入。. 2 分混合均匀。30'个稀释度4孔，每孔0. 1 标准血清倍比稀释后((1:8至1:64)接种于上述培养板，每个稀释度4孔，每孔。05 为标准抗血清对照。将标准孔。为病毒对照，其余8孔作为正常细胞对照。培养箱中培养，逐日观察病变，记录结果(按表1填写)。表1中和试验 3 45 6 7 89 ，二者的滴度指数之差的反对数即为中和指数。若正常细胞与标准血清对照为阴性，标准毒对照为阳性，按表2判定结果。定病毒一稀释血清法)本试验用于鉴定鱼血清中是否含有抗的中和抗体。，使用前用稀释至50. I 清待检血清和正常血清(阴性血清)用等量的毫升含青霉素200 霉素 195200 释后，于45℃灭活30 冷却后使用。其稀释度由1:4到l : 256,每管含量为。.2 2. 2. 2. 2. 2分别在上述各管中加入。. 2 为待检血清等量)的501 悬液，充分摇匀混合12. 2. 2. 2. 3于30 2. 2. 2. 4取出后分别接种于长满个稀释度4孔，每孔0. 1 2. 2. 2. 5按上述步骤设立正常血清对照;将标准悬液连续10倍稀释后(10-'^接种上述培养板，每稀释度4孔，每孔。.1 病毒悬液毒力滴度对照;96孔微量细胞培养板2. 2. 2. 2. 6各孔加人细胞维持液至总量0. 2 养箱培养，逐日观察病变，记录结果(按表3填写)。表3中和试验 2 3 45 6 7 -' "能保护50%的细胞培养孔不产生病变的最高血清稀释度)。血清中和抗体效价大于或等于1!16者为阳性，小于1:16者为阴性。细胞培养又出现经中和试验为阳性者可判定患有传染性胰坏死病。经细胞培养出现经中和试验为阳性者判定为携带者。若中和试验为可疑，则判定为可疑。d·若无临床症状，经细胞培养也不出现鱼血清中抗中和抗体为阳性者，则判定在近期内患过传染性胰坏死病。若仅有临床症状，或仅能在细胞培养中出现不能被抗进一步作其他病检查。称病病原属弹状病毒。本病流行于美国、加拿大和日本。主要危害虹蹲、红点马苏大马哈鱼等蛙蹲鱼类的稚鱼，一龄鱼亦有感染的情况。水温15℃以上鱼呈无症状带毒状态，鱼卵也可带毒。力地随水漂浮着，接着顺水流摇晃地游着，虽有痉挛似地动作，但不久就上浮，横着身子而且时常急剧地游泳，不久就死亡。这期间所见狂奔动作为本病的一个特征。门通常拖着一条半透明的粪便，亦是该病的一个特征。腹部有腹水且肿胀，眼球突出。胸鳍基部、背鳍一直到前部，以及肛门附近的躯干肌肉常有出血现象，口腔壁亦有出血点。具有卵黄的仔鱼卵黄囊出血，内充满浆液而肿胀。坏死，脾脏和幽门垂四周的脂肪组织、腹膜、脑和围心膜等处常有出血点，肠道也有出血现象。同的是传染性造血器官坏死病病毒()除可用适分离病毒细胞是养温度280C,培养温度是15`C，在培养过程中每日观察细胞变化情况，观察73胞聚集成族，似葡萄样，然后崩解。若出现冻融一次后，低速离心除去细胞碎片，上清液作病毒鉴定。若7为阴性结果。若7将该瓶培养液作接种材料再接种一次，同的是用毒培养温度是15℃。3条。5病毒性出血性败血病(称病病原属弹状病毒。本病是欧洲地方病。主要危害虹缚全长5 300 状分三型:急性型见流行早期，症状发展很快，死亡率高。慢性型在流行初期以后可见，症状发展慢，鱼体各部的出血不象急性型那样显著，死亡率低。神经型见流行末期。 1955.，.，活动情况流行后期病鱼有时在水里扭转游动，有时侧游，有时又突然向前猛烈游动。球突出，腹部膨胀，贫血，鳃、鳍基部、眼和眼眶等处出血。脏脂肪组织、缥和肠等处出血，以急性型显著。神经型看不出特异的病变。1. 1, 条。但一般不抽取血清样品作抗体检测，养，在培养过程中每日观察细胞变化情况，观察76的条件下，2-4 胞缩短，然后变成球形，不久就坏死从瓶壁脱落。若出现冻融一次后，低速离心除掉细胞碎片，上清液作病毒鉴定。若7为阴性结果。若7将该瓶细胞培养液作为接种材料再接种一次，以判断是否有病毒鉴定对于对在细胞培养中出现了1,抗血清改为抗毒培养温度是150C,细胞培养又出现经中和试验为阳性者可判定患有病毒性出血性败血症。经细胞培养出现经中和试验为阳性者则判定为判定为可疑。仅能在组织培养中出现不能被抗能称患有进一步作其他病检查。6斑点叉尾如病毒病(称病病原属疤疹病毒。本病流行于美国。对鱼龄8个月内的斑点叉尾蛔是一种急性传染病，死亡率可达100%旋转、又抽搐，不久便沉人水底，接着垂直地浮于水面，最终死亡。显著褪色。皮肤和鳍有出血现象。晚期病鱼一般腹部膨胀，肛门突出。r 195胃扩张，内有粘液状液体。肌肉、肾、肝、脾等处可见出血。同的是适培养温度是25^30`病毒培养，在培养过程中每日观察细胞变化情况，观察71^-3 始出现合胞体，继而细胞崩解出现7将该瓶细胞培养液作为接种材料再接种一次，毒培养温度是25 3综合判定同3. 3条。7鲤春病毒病(称病病原属弹状病毒。本病流行于欧洲。危害一龄以上的鲤鱼。进行缓慢地呼吸，但不久便沉入水底。球突出，腹部膨胀，肛门发红，肿胀。鳃有出血点。腹水。肠道有严重炎症。几乎所有内脏都有出血点，缥壁是最常见的部位，肌肉亦由于出血而发红。脾脏显著肿大。亦可见黄胆症状。此外也可见内脏诸器官水肿。条。但一般不取鱼卵作病毒分离。，在培养过程中，每日观察细胞变化情况，观察72-4 征为细胞变圆，继而崩解脱落。其他同3. 2. 病毒鉴定r 15805. 毒培养温度是2022 'C 疖疮病(病病原是灭蛙气单胞菌(本病流行于欧洲、美国、加拿大和日本等国，流行范围较广。主要危害鱿科高龄鱼。一般分三型:急性型，病鱼急性死亡，外部无症状;亚急性型，病情发展较慢，在躯千肌肉形成感染病灶—疖疮;慢性型，病鱼长期处于带菌状态。动缓慢。干部有膨隆或溃疡患处。鳍基部充血，通常鳃部亦多数有出血点。脏软化、肿大，脾脏亦肿大，多呈淡红色，也有暗红色，肝脏一般褪色，脂肪增多。生褐色水溶性色素;菌体不运动;大多数菌株用这些特性可以检查灭蛙气单胞菌的存在。油镜、暗视野)、恒温箱、接种环、培养皿等。0萄糖蛋白陈水、革兰氏染色液I、I, I, 制方法见附录B(补充件)〕。死组织已外露时不必切开)。用干净的载玻片紧贴病灶并挤压，取下载玻片后滴加1好盖玻片，用400^坏小脑，使鱼失去运动能力，再用酒精棉球擦净、消毒被检鱼体表，在肛门前面。.5 后从此处沿一侧向背部逐步转向头部剪成弧形，打开腹腔，露出肾脏。5无菌玻棒磨碎肾脏，再倾人45^凝固稍干后加入450脂覆盖，琼脂凝固后把培养皿倒置在25℃培养箱内培养48 起菌落接种到22℃恒温箱中培养72 h，观察有无水溶性褐色色素产生。每个培养皿出现3个以上黄色菌落时选取3个，3个以下时全部接至个菌落分别接种一支斜面。一1. 2 1接种环挑取在4 盖玻片用400^B/T 195另取一干净载玻片，滴1接种环挑取同一斜面上的菌苔少许涂片，干燥后在火焰上通过三次固定革兰氏染色液21液脱色至酒精刚刚不出现紫色为止， V 25 回25℃保温68. 2. 1. 3. 3的检验中，体运动和形态的观察。观察菌体运动的载玻片上的水不能干捆。在暗视野中，菌体活动范围超过视野的1/4，称为具运动性，菌体原地作布朗运动不能称为运动或具运动性。革兰氏染色后，显微镜下看到红色菌体为革兰氏阴性细菌。细菌呈紫色为阳性细菌，菌体颜色不易辨别时，应重新检查一次染色特性，革兰氏染色的灭蛙产气单胞菌，菌体大约为。. 82 1.。一1. 8 按黄色菌落处理，转接没有出现菌落或不是黄色菌落时即认定没有疖疮病。菌苔有色素而未渗入培养基中不算作产生水溶性色素。d. V 入V 色为阳性，黄色为阴性。数鱼可能多处)有红肿、隆起或局部软化，组织坏死等明显病灶，并检出不运动短杆菌即可判定为疖疮病。菌在体为革兰氏阴性短杆菌，不运动，在论有无肉眼可见病症都可判定为疖疮症。弧菌病(病病原菌大多数是鳗弧菌(本病流行于欧洲、美国、加拿大和日本等国。弧菌属细菌对淡水鱼、半咸水鱼、海水鱼均有一定的致病力，危害多种鱼类，如娃科鱼类、香鱼、鳗鲡等。池边和水面缓慢游动。躯干的任一部位的皮下或肌肉形成一个比较大的类似疖疮的溃疡，形状不规则，伴有出血，其他地方肌肉也常有出血点。眼球突出，鳃、眼球以及各鳍也出血，肛门发红，肤点状出血、发红。腹部、下颗和各鳍最为明显，尤以胸鳍严重，往往坏死糜烂。香鱼:剖检在躯干任一部位的肌肉内出现一个半透明的白斑，溃疡患部同时伴有出血。C， 195剖检弧菌病病鱼可见到下列症状的全部或部分。肠有炎症，肠管充血或出血，内有黄褐色粘液物，肠内壁有肉眼可见的溃疡。肝脏窟血、肿大、有出血点或出血斑。养基和试剂丁发酵培养基、革兰氏染色液、1%澳察香草酚蓝酒精溶液、I%。一蔡酚酒精溶液、1%盐酸二甲基对苯撑二胺水溶液、弧菌抑制素。/129试纸片、3%氧化氢溶液[配制方法见附录C(补充件)〕。鱼体表溃疡已深入真皮层时，一般直接用接种环从患部取样在表无溃疡或体表浅溃疡时，可以无菌操作打开腹腔剪卞一块肝脏或肾脏组织至接种环压一下组织块再在平皿上划线。5'选单个菌落转接至取养1824 色特性和形态的观察。接种环挑取菌苔少许接至糖发酵培养基中，于25'C，经24 1 0/一1# &播.‘。润，再滴加约等量的1 % ，，二‘二、，，，，、、石弄二‘二少许菌苔在滤纸上涂抹。接种环挑取一环菌苔徐于干净载玻片上，然后滴加一滴3环^氧化氢溶液。把浸过弧菌抑制素0/129的小圆试纸片贴在涂布区的中央，倒置平皿，于25℃经18^24 态、光泽、菌体运动情况，菌体形态及革兰氏染，并作好记录。糖发酵培养24 明利用葡萄搪。气，小套管中充满培养基无气体为不产气。变为蓝色者为阳性，10阳性)冒气泡者为阴性。，有细菌生长为不敏感。表有出血点或出血斑症状应拟为弧菌病，菌，直或稍弯曲，发酵葡萄糖，但不产气。半透明，正圆隆起，周缘光滑，有光泽。菌体为革兰氏阴性短氧化酶阳性，过氧化氢酶阳性，对弧菌抑制素0/129敏感。r 19510昏眩病(病病原体为脑粘体虫(本病流行于欧洲、美国、加拿大、新西兰、南美和非洲一些国家，流行范围很广。主要是蛙S#鱼类的疾病。部露出水面作旋转运动狂游，旋转角度达180C。尾部呈黑色。昏眩病后期鳃盖骨萎缩，鳃裸露在外，下领骨畸形，脊椎弯曲，眼后头盖骨严重凹陷，无症状，可根据鱼的数量抽样检查。1 000尾以下抽检4尾，1 000尾以上抽检5^5-8 面观呈椭圆形至圆形，有两个梨形极囊，抱质中有两个圆形的胚核，无嗜碘泡，感染后三个月左右形成胞囊。察耳区软骨组织中有无胞囊(乳白色，直径为1^-2 若有胞囊，取一小块胞囊放在载玻片上，压碎，用450^见到大量脑粘体虫抱子。从耳石区将软骨组织切开，刮取内含物作涂片镜检。左右耳石区都需检查。将鱼的头部割下，并纵切开。放在高速搅拌器内或研钵内，加入20 分搅拌后，取2滴水，放在载玻片上镜检。鱼类就可能感染昏眩病。对于未形成胞囊的病鱼，通过头部软骨组织的病理切片能观察到脑粘体虫的营养体。病理切片按常规切片方法，苏木精、曙红染色。检查到脑粘体虫的抱子或营养体，则判定为昏眩病。检查到脑粘体虫营养体或抱子，则判定为昏眩病。充件)A，细胞生长液称取9. 4 g 00 03. 421 却后，在无菌室内，加过滤灭菌的谷氨酞胺0. 3 g，用10 后分装备用，用前再加10%小牛血清。注:①日本制药株式会社。小牛血清细胞生长液为细胞维持液。析纯)0. 8 析纯)0. 02 析纯)0. 02 分析纯)0. 115 析纯)0. 02 析纯)0. 1 化钠(析纯)8. 0 析纯)0. 2 析纯)0. 1 6H}O，分析纯)0. 1 " 2H,O，分析纯)1. 15 析纯)0. 2 00 过滤除菌，普通冰箱保存备用。酸氢钠称取碳酸氢钠7.5 g(分析纯或化学纯)溶于100 后密封高压灭菌((103. 421 过滤除菌。附录充件)99990‘峪仄1孟化试剂)糖原‘生化试剂)拟化钠(分析纯)肉浸汁(生化试剂) 195十二烷基磺酸钠(化学纯)0.1 用)1500 热溶解，瓶，2%琼脂琼脂(医用)209蒸馏水1 000 0 3 化试剂)79酵母膏(生化试剂)39氯化钠(分析纯)2. 5 用)1500 热溶解，用10%0 用。析纯)19蛋白陈(生化试剂)1析纯)。59蒸馏水100 热溶解，用10%氢氧化钠校正6，分装试管，在55. 157 6 用。晶紫酒精饱和液20 mL,l%草酸按水溶液80 g,碘化钾2兰氏染色液.:95%酒精(医用)。革兰氏染色液N:黄酒精溶液10 蒸馏水90 H}O，分析纯)1 =O. 9) 40 0%) 160 录充件)用)00 195上述成分混合加热溶解，用10%部分在103. 421 却至45 一部分分装试管，0 化钠加入水中加热溶解，然后加入葡萄糖，冷却后用10%氢氧化钠校正6，再加入1%澳胳香草酚蓝溶液0. 4 装试管每试管中倒置一小套管。 0 3革兰氏染色液同附录B(补充件)中 %澳胳香草酚蓝酒精溶液澳察香草酚蓝1酒精中。1 %酒精中。1%盐酸二甲基对苯撑二胺水溶液盐酸二甲基对苯撑二胺17弧菌抑制素0/129试纸片二氨基二异丙基喋陡(2. 470 其1 直径6 其充分吸收，37 每纸片含弧菌抑制素0/129 40 30/氧化氢溶液取分析纯过氧化氢用蒸馏水稀释至300^'10%0附加说明:本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由中国水产科学研究院长江水产研究所归口。本标准由中国水产科学研究院长江水产研究所、中国科学院水生生物研究所、中国水产科学研究院珠江水产研究所、中国水产科学研究院淡水渔业研究中心、浙江省淡水水产研究所负责起草。本标准主要起草人左文功、韩先朴、杨先乐、王迎喜、邓国成、蒋桂珍、钱冬。
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一直用着挺顺的，但前几天手贱点了升级，然后就over了…… 复位之后重新设置也是不行的，看了下这个项目应该是暂时无人维护的状态了，所以不支持新版要么降级路由器或者放弃这个脚本，后来通过Google关键字 hiwifi shadowsocks 发现了另外一个：
这个项目目前还是蛮活跃的，HC5761A &#.5.15805s 的安装脚本如下：
cd /tmp && curl -k -o shadow.sh /cllu/hiwifi-ss/hiwifi-v1.2.5/shadow.sh && sh shadow.sh && rm shadow.sh
安装过程都是全自动的，之所以转载完整版本的，是因为感觉安装过程中的汉字提示蛮有情怀的~~
Connecting to 192.168.199.1:;
Connection established.
To escape to local shell, press ‘Ctrl+Alt+]’.
BusyBox v1.19.4 ( 00:47:10 CST) built-in shell (ash)
Enter ‘help’ for a list of built-in commands.
***********************************************************
              __  __  _              _   ____  _   TM
             / / / / (_) _      __  (_) / __/ (_)
            / /_/ / / / | | /| / / / / / /_  / /
           / __  / / /  | |/ |/ / / / / __/ / /            /_/ /_/ /_/   |__/|__/ /_/ /_/   /_/                     /
***********************************************************
root@Hiwifi:~# cd /tmp && curl -k -o shadow.sh /cllu/hi
wifi-ss/hiwifi-v1.2.5/shadow.sh && sh shadow.sh && rm shadow.sh
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100  ; 100  ;   0     0   ;     0  0:00:01  0:00:01 –:–:–  2488
/*教程请参考:极路由Shadowsocks家庭无痛翻墙实践*/
https://luolei.org/hiwifi-shadowsocks/
by @foru17
人类终于回想起了,
曾经一度被他们所支配的恐怖,
还有被囚禁于鸟笼中的那份屈辱.
進撃の巨人諫山創
Building environment… 创建临时目录ing
Done! 成功创建临时目录!
Downloading files… 下载插件ing
  % Total    % Received % Xferd  Average Speed   Time    Time     Time  Current
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Done! 下载完成
Installing… 安装ing
备份系统文件……..[完成]
Done! 插件安装成功!
adding uninstall information… 准备删除临时文件…
cleanning temporary files… 清理临时文件ing
Done! 清理完成
the whole installation Success! 插件成功安装!
日21时07分
中国第一封电子邮件
从北京发往德国
越过长城，走向世界
Done! Hello World! 一切就绪,你好世界!
极路由不同版本及不同固件的兼容性请参考：
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中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会著
出版社：中国标准出版社
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