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PD-1/PD-L1治疗性抗体（Pembrolizumab，Atezolizumab，Nivolumab）重磅上市！
目录号：S3025
别名： Phenylmethylsulfonyl Fluoride
Molecular Weight(MW): 174.19
PMSF 是一种不可逆的丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制剂。
10mM (in 1mL DMSO)
有超大折扣
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产品安全说明书
Serine Protease抑制剂选择性比较
PMSF 是一种不可逆的丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制剂。
cysteine protease
chymotrypsin
PMSF可以迅速地抑制从人胰腺纯化的胰凝乳蛋白酶的活性，而对人的胰蛋白酶影响较弱，也可以迅速地抑制人红细胞中的胰腺胆碱酯酶。PMSF是特定磷脂酰肌醇磷脂酶C得抑制剂，2 mM的PMSF即可几乎完全抑制豚鼠回肠的纵行平滑肌中卡巴胆碱激活的肌糖形成磷脂酰肌醇(PI)，但是对有甲激活的肌糖形成磷脂酰肌醇的通路则没有影响。与此不同的是，对于卡巴胆碱和钾刺激产生的肌肉收缩，PMSF都能产生短暂的抑制效果。PMSF还抑制布氏锥虫体内乙醇胺磷酸添加到糖基磷脂酰肌醇(GPI)中间产物的形成和布氏锥虫血液中GPI中间产物的肌糖残基的酰化作用。PMSF可以抑制布氏锥虫前循环形式的乙醇胺磷酸的添加和肌糖的酰化，但是不能抑制哺乳动物HeLa细胞中这一过程。PMSF是鼠源乙酰胆碱酯酶的最好的抑制剂，因为即使用8倍量BSF的抑制效果还要比PMSF低6倍。
向Sprague-Dawley大鼠腹腔内注射PMSF能产生剂量依赖的止痛效果。在大鼠体内PMSF能显著提升β-内啡肽(END)的镇痛效果。小鼠腹腔内注射PMSF能产生大麻素的效果，可以抗伤害、降低体温、保持不动性，它们的ED50分别是86 mg/kg, 224 mg/kg 和 206 mg/kg。用低剂量PMSF (30 mg/kg)预处理可以增强大麻素对甩尾反应（抗伤害效应）、自发活动性和移动性产生的作用，其增强效果分别是原来的5倍、10倍和8倍。
在PSP前12小时用PMSF处理母鸡可以完全防御迟发性神经毒性(OPIDN)，但是在在PSP之后4小时用PMSF处理则会加强神经毒性效应。
在注射1 或 10 mg/kg 3H标记的大麻素前用PMSF (30 mg/kg,腹腔注射)预处理，待注射大麻素5分钟后，对比注射的3H H标记的大麻素，大脑中大麻素的水平显著提升。用PMSF预处理可以抑制三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)诱导的神经丝(NF)退化和预防母鸡的有机磷酸酯诱导的延迟性神经病(OPIDN) 。
通过抑制脂肪酸酰胺水解酶活性，PMSF能抑制ICR 小鼠的Δ(9)- 四氢大麻酚(THC)或大麻素(AEA) 典型性拟大麻效应。
推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)
动物实验：
Animal Models: 注射大麻素的雄性ICR小鼠
Formulation: 溶于麻油
Dosages: ~1000 mg/kg
Administration: 在静脉注射大麻素之前10分钟腹腔注射(Only for Reference)
溶解度 (25°C)
(200.93 mM)
(86.11 mM)
* 溶解度检测是由Selleck技术部门检测的，可能会和文献中提供的溶解度有所差异，这是由于生产工艺和批次不同产生的正常现象。请按照顺序依次加入各个纯溶剂。
3 years -20&C powder
Phenylmethylsulfonyl Fluoride
摩尔浓度计算器
本计算器可帮助您计算出特定溶液中溶质的质量、溶液浓度和体积之间的关系，公式为:
质量 (g) = 浓度 (mol/L) x 体积 (L) x 分子量
摩尔浓度计算公式
*在配置溶液时，请务必参考Selleck产品标签上、MSDS / COA（可在Selleck的产品页面获得）批次特异的分子量使用本工具。
稀释计算器
用本工具协助配置特定浓度的溶液，使用的计算公式为：
开始浓度 x 开始体积 = 最终浓度 x 最终体积
稀释公式一般简略地表示为: C1V1 = C2V2 ( 输入 输出
在配置溶液时，请务必参考Selleck产品标签上、MSDS / COA（可在Selleck的产品页面获得）批次特异的分子量使用本工具。.
连续稀释计算器方程
分子量计算器
通过输入化合物的化学式来计算其分子量：
总分子量：g/mol
注：化学分子式大小写敏感。C10H16N2O2 c10h16n2o2
摩尔浓度计算器
临床试验信息
(data from , updated on )
NCT Number
Recruitment
Conditions
Sponsor/Collaborators
Start Date
St Georges, University of London
November 2014
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蛋白含量测定及western步骤
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蛋白的提取和定量
组织用预冷1×BS洗净后，加入含PMSF的RIPA buffer（冰上操作，ul,决定未来的蛋白浓度和蛋白液体积）,，冰上孵育，10000转4℃离心10min，转上清至新管。裂解液分装后保存于-70℃
蛋白质定量：BCA蛋白测定法
①根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
②完全溶解蛋白标准品(BSA原浓度2mg/mL)mg/mL。
③将标准品按0，， ul标准品孔中，加稀释标准品的溶液补足到 ul) 200 200 200 200 200 200 200
1mg/mLBSA 0 2 5 10 15 20 25
ddH2O 25 23 20 15 10 5 0
④加2uL加到96孔板的样品孔中，加微升。⑤各孔加入200微升BCA工作液，37oC放置30分钟。注：也可以室温放置2小时，或60oC放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适量在较高温度孵育，或延长孵育时间。
⑥测定A的波长，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
⑦计算调蛋白时所需BS和RSB的体积（调所有样品浓度至3ug/ul）：
总体积=蛋白体积*蛋白浓度/3（ul）
RSB=1/5*总体积（ul）
BS=总体积-RSB-蛋白体积（ul）
先加RSB（对蛋白保护作用），后加BS。最后放于-70℃保存。
Western Blot
1. 玻璃板：注意对齐、夹紧，防止漏出，短板朝前。
2. 表配制分离胶3. 灌胶：将配好的凝胶溶液沿玻璃板长面灌入，为方便可将玻璃板向后倾斜，灌至距绿线1cm左右，用dd水封顶，放置30－40min。状况好时往往能观察到水与胶的界限。
4. 分离胶凝固后，配制浓缩胶。将水倒掉，灌好浓缩胶，立刻插入梳子，等待40min。在此期间，打开水浴锅（100℃）
注：此步后可停止，将胶连同梳子放入4℃保存一夜，若保存时间较长，为防止流失，可加盖湿润的滤纸和保鲜膜。
5．电泳前准备好：蛋白、Marker、1＊running buffer。蛋白在沸水中煮3－5min。6．拔梳子，立即用1＊running buffer冲洗孔道（用塑料吸管）。
7．将玻璃板取出，固定于电泳槽（短面冲里－相对），也要牢固，可先将电泳液倒入两玻璃板槽间观察是否渗漏。8．固定好后，加样。
加入物质及体积
3.5ul Marker (thermo #26616)
9．玻璃电泳槽倒满1＊running buffer，电泳液没过电泳槽中的钢丝即可，注意标记好带的顺序。
黑对黑红对红，电压100V
电泳1－1.5h，等蓝色条带跑出后再等待10－15min。蓝带对应8KD蛋白，根据蛋白样品分子量决定具体的电泳时间，确保不让目标蛋白抛出凝胶。一般可等蓝带完全跑出凝胶后10多分钟停止电泳。
Western-ECL
1. 玻璃板取出，用跷胶片打开，标记好切胶位置，将浓缩胶和分离胶上的空白切掉。切胶时不要划，要切。注意，在右上角切口标记，量胶的长、宽。
2. 将切好的胶（粘在一片玻璃板上）浸入Transbuffer，晃动使胶脱离下来，放上摇床，中速30min。
3. 根据胶的长宽剪滤纸和膜（不能折，不能用手碰），膜的右上角与胶一样切口。滤纸不能太大，膜可以大一点。将滤纸浸入Transbuffer。（Transbuffer不倒掉）
① 滤纸可以采用学校的大张滤纸剪裁，四层叠在一起使用
② 三明治由低层向高层为：四层滤纸――膜――胶――四层滤纸，大小要一致
③ 滤纸、膜、胶都需要用TRANS BUFFER浸透，上面滴加TRANS BUFFER
④伏转印分钟
如果转膜结束后不立即做，可以用TRANS BUFFER洗一洗，BST洗一洗，晾干，保鲜膜包好后置四度保存。
再用之前，再用TRANS BUFFER洗一洗，BST洗一洗。即可封闭
1. 将*TBS稀释至1*（100ml→00ml），加入ml Tween 20（0.1％），即TBST。（Tween较粘稠，把枪头剪掉一块。）
2．配封闭液，脱脂奶粉5g，用量筒加100ml TBST，一般50ml足够（2.5g脱脂奶粉，TBST50ml。）
将膜用BST洗一下，根据Marker分子量切带（在右上角切口标记一定要在平的地方切）。
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78页56页82页18页72页59页54页80页69页17页&&& 】大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。
&&&&细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min就可以。
&&&&在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。
&&&&1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。
&&&&2*破3S停10S，破个二三十次看看。
&&&&3*变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。在破碎时试着加大体积,强度最好不要超过60%.
&&&&4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，最好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。
&&&&链霉菌（放线菌）超声破碎的，用的方法条件是什么？
&&&&前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。
&&&&使用超声破碎时采用的具体条件是：
&&&&(1)取细菌的24h培养液于5000r／min下离心5min收集菌体．
&&&&(2)用pH7．5的Na2HPO-NaH2PO缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40mL大塑料试管内．
&&&&(3)将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎(功率200W，1／2”探头，破碎30s，间歇30S)．
&&&&(4)破碎液于12000r／min下高速冷冻离心30min，收集细胞碎片和上清夜．
&&&&超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，超5s，停5s，冰浴，要加终浓度1mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。
&&&&放线菌属于原核生物系统进化树上的（G＋C）摩尔百分含量（mol％）高的革兰氏阳性菌（Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学组分变化很大。
&&&&在做大肠杆菌超声时，采用的是400W，超5停5的方法，效果不错，但是用在链霉菌上，似乎没什么效果。会不会就是由于细胞壁组成差异造成的呢，因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。
&&&&再有镜检是检验破碎效果,但是细胞破碎程度和我需要的酶获得之间有正比关系吗？破碎时间长也会影响到酶的活性。所以想问问anaisai战友，你提供的“功率200W，1／2”探头，破碎30s，间歇30S”的条件好像是用于破碎链霉菌孢子的，也可以用于发酵离心后的菌泥吗？如果可以，你破碎的全程时间大概是多少呢？
&&&&如果你需要的是胞内酶，细胞破碎程度和需要的酶获得之间基本上有正比关系。破碎时间长的确会影响到酶的活性。这就需要在最佳的破碎时间和酶活性之间做出判断，最直接的办法是先绘制相关曲线（酶活性和时间的关系曲线）。
&&&&实验中，破碎的是棒状杆菌（也是很难破壁的G+菌），破碎时间控制在30min左右，酶活较好。
&&&&如果是基质菌丝的话,好可以考虑用溶菌酶处理一下.
&&&&一般来讲这几种方法读可以的:
&&&&一,液氮研磨
&&&&二,用frenchpress破碎
&&&&三，超声波破碎
&&&&四，溶菌酶处理预处理
&&&&超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热（42－43℃）。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约5000℃）、高压（可达500×104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。
&&&&100g大肠杆菌溶于1L破碎液里（破碎掖：50mMTris-Cl(PH8.5)5mMEDTA0.14MNaCl），搅拌，发现菌液发粘，菌体不能够很好分散，用高压匀质机破碎，加压后，菌液不能进入匀质机，速度很慢，请问是何原因？能有好的办法解决，很好用匀质机快速破碎菌体？将破碎液的量加大，不能很好分散可能是量太大。超声处理5－10分钟，菌液粘度即可大大降低，也可促进菌体分散。
&&&&不同型号的设备功率不一样，功率的大小决定了使用变幅杆的大小范围（直径2mm至几十毫米），你使用多大的变幅杆就在设备的上调至该刻度（很简单的）！变幅杆的大小决定了处理量5ml一下选3mm，5～50ml可选6～8mm，50ml以上选10mm的变幅杆，依此类推！占空比不用关心的，主要是指超声时间和停顿时间的比值。
&&&&酵母破碎的问题
&&&&一般的PROTOCOL都是用glassbeads破碎酵母细胞sigmaG-8772酵母破碎效果好的我所做过的方法中还是玻璃珠，效率很高，而且对目的蛋白活性不会有什么影响。一般应该用这个方法。
&&&&化学裂解的方法，10g酵母加1ml的乙酸乙酯，充分搅拌至液体状。此法的裂解效果不错的加尿素裂解液（尿素8mol/L,NaCl0.5mol/L,Tris20mmol/L,EDTA20mmol/L,2%SDS,PH值
&&&&8.0），据说效果可以。
&&&&毕氏酵母细胞破碎法
&&&&在破碎遇到的问题是菌体浓度太低，OD620nm在4-6之间。细胞破碎仪的最低破碎体积为4ml左右，这样再稀释一倍，OD就到2-3啦，我们怀疑破碎完溶出蛋白和酶活测定时会测不准。所以请教大家细胞破碎时最低的菌浓多少为下限？我们的菌是一种棒杆菌。破碎后，你可将液体放入透析袋中浓缩。
&&&&我们所做的方法是按照1：20的比例将离心后的菌体（e.coli）溶解于超声缓冲液（50mM磷酸pH8.0）300w10s/10s破碎20分钟。做了镜检！基本全被破碎了！我做蛋白纯化的，做的包涵体。实验中我们的菌体浓度相对独立，与培养液中的菌体od无关，不收其限制，便于操作者调控。
&&&&一般按每g湿菌体加5-10ml裂菌缓冲液。
&&&&超声肯定会产热，所以一定要有降温装置，除非你需要得成分耐高温。
?(3.20 16:53)
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(初入文坛)
在线: 7.2小时
虫号: 6524791
求水稻叶片中酶活性的测定方法已有1人参与
最近在做水稻抗病研究，需要测定叶片中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）和过氧化氢酶（CAT）的活性，目前还没能找到这些酶活性的具体计算方法，请求大家能给予帮助！
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(知名作家)
在线: 706.4小时
虫号: 1183978
注册: 性别: GG专业: 生物化学管辖:
【答案】应助回帖
一、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定
APX 是植物体内重要的抗氧化酶, 主要功能是分解H2O2, 此过程通过抗坏血酸- 谷胱甘肽循环来完成。此外, 它还直接参与抗坏血酸的氧化还原代谢, 而抗坏血酸能有效地清除多种活性氧自由基。因此，APX被认为与果实的抗热性直接相关。
2.所用方法
（1）采用碘液滴定法:
称取新鲜材料1 g，剪碎置研钵中，加少量石英砂及pH值6.0 的磷酸盐缓冲液，迅速研磨成浆，20 ℃下浸提30 min，中间摇动数次，3000 r /min 离心后保留上清液即为酶液。反应底物为抗坏血酸，加入酶液2 mL，20 ℃下反应10 min 后，立即加入偏磷酸1 mL，终止酶的活动，抗坏血酸被消耗的量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来进行测定，加淀粉溶液几滴作指示剂，以碘液滴定出现浅蓝色为止，记录滴定值，用底物被消耗的量来表示APX 的活性。每个处理设3 个重复。
（2）紫外吸收法：
称取1g芥蓝叶片组织，加入1.6 mL预冷的磷酸缓冲液（PBS-K）（pH 7.8）提取液（含1 mmol·L-1 AsA，3 mmol·L-1β-巯基乙醇，0.5 mmol·L-1PMSF，2% PVP，1 mM EDTA）。用液氮研磨，提取液于4℃，12000×g离心20 min，上清液用于酶活性的测定。取0.10 ml 酶液（可视情况调整），加入1.70 ml 含0.1 mM EDTA-Na2的PBS（0.05 mol/L，pH7.0），再加入0.10 ml 5 mM的AsA，最后加入0.10 ml 20mM H2O2，立即在20℃下测定D290（紫外）值在一定时间内的变化，计算单位时间内AsA减少量，并求酶活性（室温下测定，缓冲液调零）。 APX总活性(uM·g-1·min-1) = △OD×Vr/ (A×d×Vt×W×△t)
△OD：反应时间内吸光度的变化； △t：反应时间，min；
Vr：提取液体积，mL； A：消光系数，2.8mM-1﹒cm-1； d：比色杯厚度，1cm； Vt：测定液体积，mL；
W：样品鲜重，g。
二、 过氧化氢酶（CAT）活性测定
过氧化氢酶（CAT）属于血红蛋白，含有铁，能够催化过氧化氢分解为水和氧分子，此过程中起传递电子的作用，过氧化氢既是氧化剂又是还原剂，因此可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。
2.CAT活性测定方法
碘化钾滴定法：
本方法利用H2O2能将KI中的I-氧化，生成I2，以淀粉作为滴定终点指示剂，用硫代硫酸钠滴定，计算出生成I2的量，再换算所消耗H2O2的量。取100ml三角瓶6个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml立即向4、5、6号瓶中各加入3.6ml/L硫酸5ml以终止反应。作为空白测定然后将各瓶放在20错误！未找到引用源。水浴中保温，待瓶内温度达到20错误！未找到引用源。时，并向各瓶准确加入5ml0.1mol/LH2O2摇匀，记录时间。5min后再依次向1、2、3号瓶中各加入3.6mol/L硫酸5ml终止酶促反应，然后向每瓶各加20%碘化钾1ml，3滴钼酸铵及5滴淀粉指示剂。用0.02mol/L硫代硫酸钠滴定至蓝色消失
过氧化氢酶活性=错误！未找到引用源。
A：空白值滴定值（ml） B：样品滴定值（ml）
C：Na2S2O2浓度（mmol/L） a：测定时酶液用量（ml）
V：酶液总体积 W：样品重（g）
t：反应时间（min） 17:1/2H2O2的摩尔质量（mg）
2.紫外吸收法：
H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸
25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，计算。以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位(u)。过氧化氢酶活性[u/(g×min)]= A240×VT/(0.1V1×t×W)。其中A240 = AS3- (AS1-AS2)/2； AS1、AS2样品管吸光值； AS3加入失活酶液的对照管吸光值； VT粗酶提取液总体积(ml)； V1测定用粗酶液体积(ml)； W样品鲜重(g)； 0.1是A240每下降0.1为1个酶活单位(u)； t加过氧化氢到最后一次读数时间(min)。
三、过氧化物酶（POD）测定方法
过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，可用分光光度计测量生成物的含量．
2.POD活性测定方法
称取植物材料 1 g ，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 r ／ min 离心 10 min ，上清液转入 100 mL 容量瓶中，残渣再用 5 mL 磷酸缓冲液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。 2 、取光径 1 cm 比色杯 2 只，于 1 只中加入反应混合液 3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ，作为对照，另 1 只中加入反应混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性过高可稀释之），立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长 470 nm 下吸光度值，每隔 1min 读数一次。
3、结果计算 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min · g （鲜重） ] 表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。 过氧化物酶活性 [u/ （ g · min ）
ΔA470为反应时间内吸光值的变化； W为所称样品重，g；
t为反应时间，min； VT为提取酶液总体积，ml； VS为测定时取用酶液体积，ml。
四、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）
1、试剂的配制
（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：
A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量
358.14）71.7g；
B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量
156.01）31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，
B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。
参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，～268。
（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）
定容至1000ml。
（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定
容至100ml。
（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。
（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。
酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000r / min 离心20min，上清液即为酶液。
2、酶活性测定
（1）反应混合液配制：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液
0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；
（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中
（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min； 同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。
（4）以不照光的对照管（只有缓冲液并置于暗处）调零后，避光测OD560(出现颜色即可测定)。
（5）酶活性计算：SOD活性单位以抑制NBT光化还原50％所需酶量（测的样品值要在最大管的一半左右才合适，否则要调整酶量）为1个酶活单位（u）。
SOD总活性＝ [( Ack-AE )×V]/（1/2Ack×W×Vt）
SOD比活力＝SOD总活性/蛋白质含量
SOD总活性以鲜重酶单位每克表示（u/g FW）；比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示；Ack为照光对照管的吸光度；AE为样品管的吸光
度；V为样品液总体积（ml,1.6ml，加入PBS的体积)；Vt为测定时的酶液用量（ml，30ul）；W为样品鲜重（g，测定时应换算为叶绿体的质量mg）；蛋白质含量单位为mg/g。
及时行乐，人生不留遗憾！
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南京建成吗？
每一步选择是偶然又是必然！希望宝宝快乐安康！
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引用回帖:: Originally posted by suyanmeng at
我们公司有酶活测试盒 你们那个试剂盒大学多少钱，一个试剂盒能测多少样品啊？
(小有名气)
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请问 你解决了吗？是买的试剂盒还是怎么样测的？ 我找了些方法 但是还没验证过
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虫号: 686286
注册: 性别: GG专业: 植物遗传学
引用回帖:: Originally posted by Mr.Howard at
你们那个试剂盒大学多少钱，一个试剂盒能测多少样品啊？
... 我们公司网页有价格，每种价格各不等
(初入文坛)
在线: 7.2小时
虫号: 6524791
引用回帖:: Originally posted by 为戏92 at
请问 你解决了吗？是买的试剂盒还是怎么样测的？ 我找了些方法 但是还没验证过 还没做，也在文献中找到些方法，准备开始验证
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虫号: 5161122
注册: 专业: 光谱分析
楼主测出来了吗
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