pmsf蛋白酶抑制剂剂到底什么时候加呀,裂解前还是裂解后

蛋白酶抑制剂混合物 Phosphatas蛋白酶抑制剂价格
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蛋白酶抑制剂混合物 Phosphatas蛋白酶抑制剂价格
蛋白酶抑制剂混合片剂,铝箔泡罩包装 cOmplete ULTRA Tablets, Mini
用于在哺乳动物、细菌、酵母或植物细胞的细胞裂解过程中抑制蛋白酶作用。每片可应用于10 ml提取溶液的蛋白酶抑制。
1.1 机理描述
在细胞裂解和纯化过程中,靶蛋白可能会被细胞中天然存在的蛋白
酶分解。综合了7种强大的蛋白酶抑制剂组分,不含EDTA的
cOmplete ULTRA迷你片剂可有效抑制各种蛋白酶,保护靶蛋白全
长序列和维持完整的结构。该片剂不含EDTA,能让对金属有依赖
的蛋白保持稳定,功能不受影响。
而另一种规格的cOmplete ULTRA迷你片剂,则含有8种组分,包含
了EDTA对金属蛋白酶的抑制作用。
cOmplete ULTRA迷你片剂(EDTA-free)针对源自酵母、大肠杆菌
和多种哺乳动物细胞系(如 HEK-293和CHO)的裂解液进行了优
化,能在各种细胞类型的裂解液中保护蛋白,不受到所有这些裂解
液中的丝氨酸、半胱氨酸和天冬氨酸蛋白酶的影响。
不含EDTA的cOmplete ULTRA迷你片剂同时含有不可逆和可逆性
质的蛋白酶抑制剂。其对金属蛋白酶无抑制作用。
30 个独立包装的不含EDTA的cOmplete ULTRA迷你片剂,铝箔泡罩
包装。每片可应用于10 ml提取溶液的蛋白酶抑制。
1.2 稳定性
&将片剂干燥保存在+2至+8&C下,可保存至标签上的有效期。
&2 x水储液可在+2至+8&C下稳定保存4周,在-15至-25&C下至少可保
可用于抑制细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞裂解液中的丝氨酸、
半胱氨酸和天冬氨酸蛋白酶。
不含EDTA的cOmplete ULTRA迷你片剂含有可逆的蛋白酶抑制剂
组分。因此要达到最佳的蛋白保护效果,我们建议可在每个实验步
骤后持续加入片剂进行最严格的蛋白酶抑制。
该片剂与 cOmplete ULTRA 迷你片剂的组分相同,唯一不同在于不含
EDTA或其他金属螯合剂。
2.2 直接与裂解液一起使用
一片不含EDTA的cOmplete ULTRA迷你片剂足够抑制10 ml细胞裂
解液中的蛋白酶水解活性。可直接将片剂添加到细胞裂解液(或蛋
白纯化溶液)中。
若样品的蛋白酶水解活性很高,可在10 ml裂解液中加入2 片。
2.3 制备储液(2 倍浓缩)
除了直接加入裂解液使用外,还可以将片剂溶解制备成2倍浓缩的
储液,步骤如下:
&在PE或PP管中的 5 ml 双蒸水中加入一片不含EDTA的cOmplete
ULTRA 迷你片剂 。
&涡旋混匀3分钟,或直到片剂完全溶解。
&储液即可使用。有时溶液中可见极细小的颗粒,这些颗粒对片剂
的抑制性能无任何影响,即可使用。
&该储液保存在+2 至 +8&C下可稳定放置4周,在-15至-25&C下至少
稳定保存4周。
&在长时间保存2倍储液后,颗粒可能会沉淀。在使用前快速涡旋混
3.1 质量控制
每个批次产品的蛋白酶抑制活性都利用浓缩胰腺提取物以及蛋白
酶K、胰蛋白酶和嗜热菌蛋白酶(本产品无法抑制的金属蛋白酶)
进行测试。使用通用蛋白酶底物(试卤灵标记的酪蛋白)加入上述
各蛋白酶溶液后一小时测定,核定产品的蛋白酶抑制效果。
&cOmplete ULTRA Tablets, Mini, EDTA-free, EASYpack&30 tablets&459130-BR&2522
&cOmplete ULTRA Tablets, Mini, EASYpack &30 tablets&459130-BR&2522
上海嵘崴达实业有限公司///蛋白酶抑制剂混合物 Phosphatas蛋白酶抑制剂价格本产品网址:/b2b/sangchousheng100/sell/itemid-.html小木虫 --- 500万硕博科研人员喜爱的学术科研平台
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裂解细胞时,为什么要加入蛋白酶抑制剂?
是这个意思,为什么在细胞内的时候,蛋白酶不会去分解蛋白质
而当破碎了细胞之后,就需要加入蛋白酶抑制剂来抑制 蛋白酶了呢?
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最近自己学习提取蛋白,培养细胞的总蛋白。看了好多蛋白提取的protocol还是不太明白。
1.蛋白酶抑制剂要用什么?有那几种是必须的?
2.RIPA裂解液的配方是不是固定?因为我看到好几种配方的裂解液,都叫RIPA,怎么回事?
请大家指教
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丝氨酸蛋白酶抑制剂和亮氨酸蛋白酶抑制剂,有必要的话要加EDTA。我有一份华大基因所的资料,可惜找不到了。呵呵
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我从文献上看到的细胞裂解液的配方有这么几种:
Cells were lysed in 20 mM Tris, pH 7.4, containing 137 mM NaCl, 2 mM EDTA, 10% glycerol, 50 mM glycerophosphate, 50 mM NaF, 1% Nonidet P-40, 2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, and 2mM sodium orthovanadate
20 mM Tris-HCl + 137 mM NaCl + 10% glycerol + 2mM EDTA + 50 mM glycerophosphate + 50 mM NaF + 1% Nonidet P-40 + 2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride + 2mM sodium orthovanadate, pH7.4
Cells were lysed in 20 mM Tris-HCl, pH8.0, containing 150 mM NaCl, 50 mM NaF, 2 mM EDTA, 1 mM Na3VO4, 1% NP-40, 1 μg/ml Leupeptin, 1 μg/ml Pepstatin, 1 mM PMSF
20 mM Tris-HCl + 150 mM NaCl + 50 mM NaF + 2 mM EDTA + 1 mM Na3VO4 + 1% NP-40 + 1 μg/ml Leupeptin + 1 μg/ml Pepstatin + 1 mM PMSF, pH8.0
Cells were lysed in 50 mM Tris-HCl, pH 7.4, containing 150 mM NaCl, 1 mM PMSF, 1mM EDTA, 1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS
50 mM Tris-HCl + 150 mM NaCl + 1 mM PMSF + 1mM EDTA + 1% Triton X-100 + 1% sodium deoxycholate + 0.1% SDS, pH 7.4
希望对你有用。
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蛋白酶抑制剂我一直都是用PMSF(苯甲基磺酰氟)。
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我们用tris-sucrose
我在国外读书,我们实验室一直都用这个
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我以前裂解小鼠的细胞株时用的是国产申能博彩公司的RIPA裂解液(含TritonX-100,去氧胆酸钠,NP-40,偏钒酸钠,EDTA,EGTA,aprotine,PMSF等),各组分的具体浓度说明书里没写明,价格不贵,也很好用,我检测的是一定刺激条件下磷酸化的激酶的蛋白,用的磷酸化的抗体,信号很强,可以参考下。
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一天时间没有上网,这么多XDJM帮我,感动……
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原帖由 rh_ibp2006 于
10:36 发表
我从文献上看到的细胞裂解液的配方有这么几种:
Cells were lysed in 20 mM Tris, pH 7.4, containing 137 mM NaCl, 2 mM EDTA, 10% glycerol, 50 mM glycerophosphate, 50 mM NaF, 1% Nonidet P-40, 2 mM ...
配方三好像很简单,只有PMSF是蛋白酶抑制剂,在用的时候是要现加其它的吧?你们实验室用哪一种呢?
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呵呵,这个论坛很不错
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murongxiaoxiao大叔级摄影爱好者,喜欢分享绝对零度积极有责任心,热心公益事业yiii红米达人,爱拍照的北京女孩His 标签蛋白专用蛋白酶抑制剂10mL规格
价格:¥1元
所在地:进口、国产厂商性质:经销商
品牌:型号:
公司电话:021-更新时间:
公司传真:021-
刘先生(联系我时,请说明是在中国化工仪器网上看到的,谢谢)
His 标签蛋白专用蛋白酶抑制剂10mL规格对于培养细胞样品:1. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF, 使 PMSF 的最终浓度为 1mM。2. 裂解细胞 2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血 清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分 裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管, 然后再裂解。3. 充分裂解后,g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。对于组织样品:1. 把组织剪切成细小的碎片。2. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF, 使 PMSF 的最终浓度为 1mM。3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解 液的用量。)4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。5. 充分裂解后,g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是 比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。产品及特点:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法,但是单独配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点:1. 一站式,即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。2. 安全,将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到最低。3. 灵活,分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度的 SDS-PAGE,满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。4. 使用改良的浓缩胶缓冲液,由于其含有染料,制备的浓缩胶呈蓝色,便于上样时识别加样孔。5. 电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。偶氮胭脂红B〖英文名称〗:Azocarmine B;Rosinduline 2B;C.I.50090〖其他名称〗:偶氮洋红B;偶氮红B〖CAS号〗:C28H17N3Na2O9S3=681.62〖级别〗:BS〖熔点〗:&300℃&max:~516 nm (H2O)〖〖性状〗(以下信息仅供参考)〗:红棕色粉末。易溶于吡啶,溶于水和乙二醇,极微溶于乙醇、乙酸乙酯、二甲苯、丙同、氯方、苯甲醇和橄榄油。水溶液呈蓝红色,加盐酸有棕色沉淀。在浓硫酸中呈绿色,稀释后有蓝棕色沉淀。〖用途〗:本品仅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗仅供参考)生物染色。色谱和电泳中蛋白染色。〖保存〗:RT偶氮胭脂红G〖英文名称〗:Azocarmine G;Rosinduline GXF;Rosazine;Rosinduline;N-Phenylrosinduline sulfonic acid disodium salt;C.I.50085〖其他名称〗:酸性红101;偶氮洋红G;玫红对氮蒽;偶氮红G;罗星杜林;玫红杜林His 标签蛋白专用蛋白酶抑制剂10mL规格Anti-Ephrin B (phospho Tyr317) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2mlAnti-p-VEGFR2/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml重组膜粘连蛋白-5抗体 Anti-Annexin V 0.1mlMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的小鼠抗人IgG 0.1mlGALK2 英文名称: 半乳糖激酶2抗体 0.2mlRhesus antibody Rh PRMT1 蛋白质精氨酸甲基转移酶1抗体 规格 0.1mlAnti-p-VEGFR2/FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2mlAnti-Ephrin B (phospho Tyr324/329) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2mlAnti-sVEGFR2/sFLK-1/FITC 荧光素标记可溶性血管内皮生长因子受体2抗体(人)IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml膜粘连蛋白-5抗体 Anti-Annexin V 0.1mlMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的小鼠抗人IgG 0.1mlGALM 英文名称: 半乳糖脱氢酶抗体 0.2mlRhesus antibody Rh PRMT4 组蛋白精氨酸甲基转移酶CARM1抗体 规格 0.2mlAnti-sVEGFR2/sFLK-1/FITC 荧光素标记可溶性血管内皮生长因子受体2抗体(人)IgGMulti-class antibodies规格: 0.2mlAnti-Ephrin B (phospho Tyr298) /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠磷酸化Ephrin B抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2mlAnti-SV2A/FITC 荧光素标记突触泡蛋白2A抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml膜粘连蛋白-2抗体 Anti-Annexin II 0.2mlMouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgG 0.1mlGALNS 英文名称: 软骨素裂解酶抗体 0.2mlRhesus antibody Rh PRMT5 组蛋白精氨酸甲基转移酶5抗体 规格 0.2mlAnti-SV2A/FITC 荧光素标记突触泡蛋白2A抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2mlAnti-NEP/FITC 荧光素标记脑啡肽酶抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2mlMouse Anti-human VEGF/FITC 荧光素标记小鼠抗人VEGF单克隆抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml血管位蛋白样1/血管生成素样蛋白-1抗体 Anti-ANGPTL1/ANG-1 0.2mlMouse Anti-human IgG/Cy3 Cy3标记的小鼠抗人IgG 0.1mlGALNT1 英文名称: 多肽N-乙酰基半乳糖转移酶1抗体 0.2mlRhesus antibody Rh procollagen type IIA Ⅱ型胶原&1抗体 规格 0.2mlMouse Anti-human VEGF/FITC 荧光素标记小鼠抗人VEGF单克隆抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml&IgG/PE PE标记的
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