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细胞要做基因沉默相关实验，培养基可以加双抗吗
细胞要做基因沉默相关实验，培养基可以加双抗吗
来源：互联网
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华之风问：请教园里战友，本人拟用siRNA转染做平滑肌细胞，观察基因沉默后效果的，但是我们实验室环境不太好，细胞培养容易污染，想加双抗，但不知道加双抗对基因转染沉默有无影响，谢谢！丁香园网友hainblue认为：有影响的，以前用脂质体转染的时候，说明书上说的是转染时不要用含有抗生素的培养基。他的解释是可能引起细胞死亡。具体怎么样就不知道了，比较试剂很贵，没钱作者方面的尝试。丁香园网友laugh认为：大多数不可以，因为增加了细胞通透性，抗生素的进入会增加细胞的死亡，但Qiagen的hyperfect系列可以，具体原理不知道，不过价格比较昂贵，当时因为细胞比较珍贵，就用了，效果不错，就是心痛银子。丁香园网友wlnju认为：一般的说，在实验操作之前，如果你的细胞里没有细菌污染的话，一般4~6个小时很难突然长出菌来，比如做mtt实验，mtt完全可以在普通环境里加入细胞培养上清。做转染时，在转染试剂和转染介质（我们用OPI-MEM）里，不需要添加抗生素，等转染结束后，换为普通培养基时，再加入适量的抗生素，因为血清会去除转染试剂的影响，所以这时候加抗生素对细胞没有多大影响。我是这么做的，没问题。放心吧。
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[求助]DMEM中需要加入双抗吗?
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[求助]DMEM中需要加入双抗吗?
本人要从大鼠肺中提取平滑肌细胞培养,文献中说DMEM中要有终浓度为100u/ml的青霉素和链霉素.但我师姐说,DMEM中最好不要有抗生素,对细胞有毒性.只需要洗肺的dhanks中双抗的浓度达到500-1000u/ml就可以.
请问各位.DMEM中是否需要双抗呢?假如需要的话,浓度又是多少?谢谢
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DMEM中最好要加双抗，只是不要浓度太大，对细胞影响就不大，当然有的人说只要操作和实验用品消毒过关，就不会污染，但加适当的双抗也是为了保险。
我们实验室一般先是以PBS液配成10万ｕ/ｍｌ的待用浓度，以EP管保存在－20℃的冰箱中，每管中加入0.1ml的双抗PBS液，然后需要加到DMEM中时，每100ml的DMEM中加1管即0.1ml的双抗PBS液，这样终浓度就为100ｕ/ml。
祝你顺利。
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加双抗的目的是防止细胞污染，只要操作规范一般不会污染的，所以不加双抗也可以的，我用的是1640培养基，我们都不加双抗的
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我们加了双抗的
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DMEM中不一定要加抗生素。我做细胞培养快一年了，一直没加抗生素细胞也没污染。不加抗生素培养得注意几点:
1.取材时要严格无菌操作，这是首要也是最关键的。
2.细胞活力要好，容易生长和增殖；比如骨髓基质细胞。
如果加双抗的话一般是青霉素100u/ml，链霉素100mg/ml.这种浓度的双抗对细胞的影响应该不大。
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青霉素水溶液不稳定怎么办，加了等于没加？
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我们也加双抗的，配培养液时1000mlDMEM中加青霉素62.5mg，链霉素100mg.再过滤。配转染细胞用的培养液不加双抗。
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想问下各位，我现在做神经元培养用的培养基是DMEM/F12在加双抗的时候不小心青霉素加成了80mg/L,也就是说大约是130u/ml. 我是初学者，细胞长势一点都不好，第二天细胞就死得差不多了，现在正在查找原因，加这么多青霉素会对细胞影响有这么大吗？谢谢各位
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如果细胞不是太娇气的话，最好还是加双抗！但是，有的细胞加了双抗会影响细胞生长，如果是这样的话就不能加了！
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我们实验室做细胞培养时是加的,一般100U/ml.关注今日：9 | 主题：473918
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【求助】培养基加双抗有意义吗？
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这个帖子发布于8年零81天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我是养细胞的新手，很多文献，或者很多科室，都习惯在培养基里加双抗，但是有些人是先配好，-20保存，临用加到培养基里，有些人是直接放在培养基里，我有个疑问是，青霉素和链霉素既然是做成粉剂，必然是因为其水溶液不稳定，需临用才配，那么按照我们平时的做法，双抗能起到预想的作用吗？抗生素是对细胞有影响的，尤其是做药物研究的，就更要考虑了。不知道各位大虾有什么高见。另外，本人配的双抗，第二天颜色变成淡棕色，是怎么回事？是不是失效了？
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我们一般配成高浓度贮存液。临用前才添加，因为抗生素对细胞也有一定影响，一般在不怀疑污染时尽量不添加。配制方法如下：1.青霉素1瓶（80万单位）用注射器加4ml 灭菌D-Hanks液，即成20万单位/ml溶液。2.链霉素1瓶（100万单位）用注射器加5ml灭菌D-Hanks液，即成20万单位/ml溶液。3.滤器过滤除菌。4.取1和2溶液各0.5ml混合，加入9ml灭菌的D-Hanks液，则成含青、链霉素各1万单位/ml的双抗贮存液，分装后置-20℃冰箱保存备用。5、使用时按照1%量添加贮存液，即100ml培养基中加入1ml贮存液，配置成工作浓度100单位/ml。
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呵呵，楼主，以我们养细胞的经验，一般都不用加双抗，除非是你养原代细胞，对自己的操作和试剂不甚放心，才加一点，现用现加，但也很可能只是起到心理心安慰而已，因为一但真的污染了，加了双抗也没有用。所以楼主，还是把无菌做好吧。
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双抗对细菌有用，加入培养基一周有效，之后失活，起到一点预防细菌污染的作用，如果培养条件好，可以不加。建议药物实验不加双抗，因为它对细胞形态、代谢还是有一点影响。双抗溶于生理盐水，应该是无色的，变成棕色，是否配错液了？还是药物放置时间过长，过期了？
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我们一般配成高浓度贮存液。临用前才添加，因为抗生素对细胞也有一定影响，一般在不怀疑污染时尽量不添加。配制方法如下：1.青霉素1瓶（80万单位）用注射器加4ml 灭菌D-Hanks液，即成20万单位/ml溶液。2.链霉素1瓶（100万单位）用注射器加5ml灭菌D-Hanks液，即成20万单位/ml溶液。3.滤器过滤除菌。4.取1和2溶液各0.5ml混合，加入9ml灭菌的D-Hanks液，则成含青、链霉素各1万单位/ml的双抗贮存液，分装后置-20℃冰箱保存备用。5、使用时按照1%量添加贮存液，即100ml培养基中加入1ml贮存液，配置成工作浓度100单位/ml。
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呵呵，楼主，以我们养细胞的经验，一般都不用加双抗，除非是你养原代细胞，对自己的操作和试剂不甚放心，才加一点，现用现加，但也很可能只是起到心理心安慰而已，因为一但真的污染了，加了双抗也没有用。所以楼主，还是把无菌做好吧。
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楼上各位说得好极了我这个月做过两次原代第一次加双抗，出现污染第二次不加 没有污染看见双抗很大程度上只是心理安慰就像我们酒楼吃饭拿茶水刷筷子一样另外2楼 我发觉我的配法是10ml溶链霉素 然后抽8ml溶青霉素不过 用的时候直接100ml培养基中加入1ml------好像浓度大了如果稀释 那棕色肯定没了
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加双抗就是心理作用，呵呵
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我们培养细胞的时候都加了，防止细菌生长。
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louise3653 双抗对细菌有用，加入培养基一周有效，之后失活，起到一点预防细菌污染的作用，如果培养条件好，可以不加。建议药物实验不加双抗，因为它对细胞形态、代谢还是有一点影响。双抗溶于生理盐水，应该是无色的，变成棕色，是否配错液了？还是药物放置时间过长，过期了？ 您好，请问双抗对于细胞生长和生理状态的影响，有相关文献报道或者可靠资料吗？我实验中发现加了双抗细胞扩增速度明显下降，同一批、同样条件接种的同种细胞，加双抗的培养基生长速度和不加双抗的明显不同。但是我的老板不信，认为是我的操作问题，所以我想找些理论背景支持~谢谢！
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您好，请问双抗对于细胞生长和生理状态的影响，有相关文献报道或者可靠资料吗？我实验中发现加了双抗细胞扩增速度明显下降，同一批、同样条件接种的同种细胞，加双抗的培养基生长速度和不加双抗的明显不同。但是我的老板不信，认为是我的操作问题，所以我想找些理论背景支持~谢谢！ 是药三分毒。加了多少浓度？厂家可信？
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丁香园准中级站友
您好，请问双抗对于细胞生长和生理状态的影响，有相关文献报道或者可靠资料吗？我实验中发现加了双抗细胞扩增速度明显下降，同一批、同样条件接种的同种细胞，加双抗的培养基生长速度和不加双抗的明显不同。但是我的老板不信，认为是我的操作问题，所以我想找些理论背景支持~谢谢！ 抱歉！我也没有理论支持，只是实验中观察发现的，你可以说丁香园战友也发现该现象存在，我现在培养细胞都不加双抗了
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chuckdouble
是药三分毒。加了多少浓度？厂家可信？ 只加了40U/ml, ATCC推荐50~100。我已查到可靠的文献，感谢回复！
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