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艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区的克隆、表达及其生物学特性研究（原版论文）.pdf48页
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第一军医大学 硕士学位论文
艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区的克隆、表达及其生物学特 性研究 姓名：刘红升 申请学位级别：硕士 专业：消化内科学 指导教师：陈村龙;姜泊 座机电话号码 硕士学位论文 艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区的克 隆、表达及其生物学特性研究 硕士研究生：刘红升 指导老师：陈村龙 摘要 目的： 艰难梭菌 C]ostridium difficile 是造成抗生素相关性结肠炎及伪膜性
结肠炎 PMc 的最常见致病菌。该菌造成老年人和免疫功能低下的病人抗生素
相关性腹泻及肠炎的发病率及死亡率明显升高。Cdiffieile产毒株准确快速的
诊断、鉴定，对确定病源、控制其传播、有效治疗患者是极其重要的。国外建
立的酶联免疫吸附实验 ELISA 检测Cdifficile毒素，其优点是灵敏度和特
异度高，结果可在2―4小时内得出，从而更适合指导临床实际工作，故被大力
推广，但国内对艰难梭菌诊断试剂研究较少，尤其是对Cdifficile细胞毒素B cdtB 的检测。本课题利用cdtB特点，以基因工程技术对其羧基末端功能区
进行克隆、表达并纯化出该蛋白，制备多克隆抗体，主要目的在于对该重组蛋 白生物学特性进行研究和探索，以期建立一种可快速、稳定的检测出Cdi，Fi'eile
细胞毒素B的ELISA诊断试剂。 方法： difficile 1、基因工程技术制备cdtB膜受体结合区域的重组蛋白。以C
体结合区域的功能基因，经EcoRI和肋DI双酶切后，定向插入同样经这两种酶 摘要
蛋白。 2、亲和色谱法纯化重组蛋白并进行WESTERN―BLOT分析。因表达载体
金属螯合到固相支持物共价结合的反应性基团亚氨二乙酸 IDA 上，用咪唑将
重组蛋白洗脱下来，从而达到纯化的目的。本研究选用NOVagen公司的His．Tag
brilliantblue
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家蚕和果蝇的抗菌肽cecropin B基因的原核表达及抑菌活性分析
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