怎么才能连正确阿(插入载体,目的基因,载体,重组子) - DNA技术 - 生物秀
标题: 怎么才能连正确阿(插入载体,目的基因,载体,重组子)
摘要: [怎么才能连正确阿(插入载体,目的基因,载体,重组子)] 我的载体和目的片断分别如下：我要把目的基因正向插入载体BamH1和反向插入Sal1位点，请大家帮我分析分析怎么才能连接得到正确的重组子啊？？ 谢谢了！！ 关键词:[载体 目的基因 重组子 插入载体 位点 反向插入]……
我的载体和目的片断分别如下：我要把目的基因正向插入载体BamH1和反向插入Sal1位点，请大家帮我分析分析怎么才能连接得到正确的重组子啊？？ 谢谢了！！
回复最后要得到这么个东西：希望各位高手帮帮忙！！回复从你提供的资料来看，除两端的Sal I和BamH I酶切位点外，目的片段中间应该没有这2个酶切位点；载体上只有一个Sal I酶切位点和一个BamH I酶切位点。那可以用下面的方法达到你的目的，具体方法如下：1、用Sal I和BamH I双酶切得到目的片段，然后用Klenow Fragment或T4 DNA等补齐，这样目的片段的2端都是平末端。2、用BamH I单酶切载体，然后用Klenow Fragment或T4 DNA等补齐，使载体的2端也成平末端。3、将补齐后的目的片段连入补齐后的载体片段（目的片段无论是正向插入还是反向插入，BamH I酶切位点都没有了）。然后采用酶切的方法筛选、鉴定所需的重组质粒。即，在目的片段的5"端或3"端选择一个酶切位点（目的片段上只有唯一的一个，而且应该尽量靠近目的片段的5"端或3"端，只要能区分片段的大小就行）；此外，载体上应该没有该酶切位点。然后用所选择的酶切位点的相应内切酶和Sal I酶切，通过酶切产生的小片段的大小就可判断目的片段的插入方向，选择你需要的（正向插入，暂且命名为质粒1）。4、用Sal I单酶切质粒1，再用Klenow Fragment或T4 聚合酶等补齐，使质粒1的2端也成平末端。5、将补齐后的目的片段连入补齐后的质粒1片段（目的片段无论是正向插入还是反向插入，Sal I酶切位点也都没有了）。同样，采用酶切的方法筛选、鉴定所需的重组质粒。即，在目的片段的5"端或3"端选择一个酶切位点（目的片段上只有唯一的一个，而且应该尽量靠近目的片段的5"端或3"端，只要能区分片段的大小就行）；此外，载体上应该没有该酶切位点（用上面所选的酶切位点应该就可以）。然后用所选择的酶切位点的相应内切酶酶切，通过酶切产生的小片段的大小就可判断目的片段的插入方向，选择你需要的反向插入就行了。大概过程示意图：回复有没有在酶切上下功夫的阿，因为看了你的方法后觉得筛选太麻烦了，要花费好长时间，我希望能直接连正确筛选得到正确的重组子，请问大虾们有没有好的方法啊？？急！！
相关热词：
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-分享到：更多
类型：策略塔防评分：语言：中文,英文,日文,其他
游戏大礼包手游开测表
CF手游特权大礼包CF手游公测普通礼包数码宝贝新秩序封测礼包龙门镖局贺岁钻石礼包口袋妖怪复刻新春大礼包王者荣耀普通礼包
01-28内测01-28公测01-27内测01-22公测01-21内测01-21内测01-21内测01-21公测01-20公测01-20公测
推荐阅读本月最新
手游排行网游单机
12345678910
123456789108508怎么连手机
内容为广告/垃圾，我要举报！
特聘专家具有协助内容审核的特权
举报后内容将不能在前台展示
错乱举报会导致该权利被剥夺
选择举报原因&
已有3条答案
三星8508本来就是手机啦，你要问的是怎样连接电脑吧。你下载个360手机助手，打开usb调试后就可以自动连接的了。
选择举报原因&
该手机支持OTG功能，应该能连接手机，把另一个手机当成U盘。
选择举报原因&
你好！& & &如果你要把手机连接到电脑里传输数据的话，需要你去设置一下就行了1、首先打开设置-更多-关于设备-点内部版本号七八次-然后返回就有开发者选项-你勾上USB调试就好2、然后在电脑里下载个豌豆荚或者是91助手把手机连接手机就会给你的手机安装相关的驱动，安装好以后手机就和电脑连接在一起了，然后你就可以通过电脑安装软件传输数据了。、
选择举报原因&
该内容由系统自动生成
参考价：￥2350.00
主屏尺寸4.7英寸
电池容量1860mAh
主屏分辨率像素
电池类型可拆卸式电池
后置摄像头1200万像素
CPU频率2.5GHz
前置摄像头210万像素
CPU类型高通 骁龙801
网络类型单卡
139人的综合分
电池续航2.8
屏幕效果3.6
拍照效果3.7
影音娱乐3.8
外观设计4.4
12月3日，三星在世贸天阶的 Club 5.f举办了 “年轻正发声”GALAXY A上市发布会，这场年轻向上的派对全程通过微信直播与万千网友同步见证全新GALAXYＡ系列新品的亮...
微信公众账号ZOL问答堂
关注微信，随时随地解答您的疑惑
ZOL问答堂官方微博@ZOL问答堂
微信公众账号
大家都喜欢
没找到想要的答案？那就登录提问吧}